细胞周期dna分析(pi法).docVIP

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细胞周期分析法一鞘液准备至少提前一天准备的配制方法蒸馏水中溶解调节到用或调节各地蒸馏水的酸碱度不同加蒸馏水定容至滤膜过滤后室温保存二制备一个阴性对照来设定流式细胞仪的取样参数和十字门的范围没有染色的细胞制备过程如下仅不加抗体三实验步骤取对数期生长细胞倒去培养液胰酶适度消化细胞用培养液吹打离心弃上清洗次加吹匀务必吹散加入预冷乙醇中标准做法是将细胞悬液加入预冷酒精固定时可加入以增加膜的通透性封口膜封口固定或过夜可长至一个月离心收集细胞洗两次用重悬细胞并转移至离心管中轻轻吹打加入约至终浓度水浴消化加入

细胞周期/DNA分析(PI法) 一、鞘液准备(至少3L PBS,提前一天准备) 0.01M的PBS配制方法:800ml蒸馏水中溶解NaCl8.0g;KCl0.2g;Na2HPO40.24g;调节pH到7.2-7.4(用HCl或NaOH调节,各地蒸馏水的酸碱度不同),加蒸馏水定容至1L,0.22um滤膜过滤后,室温保存。 二、制备一个阴性对照来设定流式细胞仪的取样参数和十字门的范围: 没有染色的细胞(制备过程如下,仅不加抗体) 三、实验步骤 1.取对数期生长细胞,倒去培养液,胰酶适度消化细胞,用培养液吹打,1000rpm,离心10min弃上清; 2.PBS洗2次,加0.5ml吹匀,务必吹散;

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