抗体制备技术.pptVIP

（四）单克隆抗体的应用 1、医学检验诊断试剂 利用单抗具有的特质-特异性与纯度高，理化性均一～ 2、蛋白质的提纯 将其作为亲和层析中的重要配体～ 3、肿瘤的导向治疗协助示踪 三、基因工程抗体技术 基因工程抗体（genetic engineering antibody）又称重组抗体，指应用DNA重组及蛋白工程技术对编码抗体的基因按不同需求进行改造和装配，经导入适宜的受体细胞后重新表达的抗体。 包括：（一）人源化、小分子、双价特异 及抗体融合蛋白等。 （二）抗体库技术 （一）人源化抗体（humanized antibody） 人源化抗体指将鼠源性单抗，通过基因克隆和DNA重组及蛋白质工程学等技术，用人源氨基酸序列取代鼠的使其保留亲本鼠单抗的亲和性与特异性，但降低鼠单抗的异源性利于人体内使用。 1、嵌合抗体（chimeric antibody） 2、改形抗体（reshaped antibody） （二）小分子抗体 小分子抗体指相对分子质量比较小但具有抗原结合功能的分子片段～。 小分子抗体：抗原结合片段（Fab）、可变 区片段（Fv）等～ 优点：分子小，通透性强 原核细胞表达，成本低 不含Fc段，不与带Fc段受体反应 半衰期短，利于及时清除 （三）双特异性抗体 双特异性抗体(bispecific antibody)又称双功能抗体。他具有针对两个不同抗原位点结合的特性，可同时与两种不同抗原发生结合，不同于天然抗体。 1、化学交联～ 2、细胞工程～ 3、基因工程～ （四）抗体库技术 抗体库技术是指用细菌克隆代替B细胞克隆来表达制备各种抗体（抗体谱）。 噬菌体展示(phage display)，即用分子克隆的方法将外源基因片段插入噬菌体壳蛋白的非必需区，该基因的表达产物与壳蛋白一起以融合蛋白的形式展示于噬菌体颗粒的表面。 （四）抗体库技术 主要特点： ①简单快速（无须细胞融合） ②选择范围广 ③可模拟体内免疫系统反应 ④可直接获得特异性人抗体 ⑤规模生产方便 抗体制备技术 1、多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）：用 一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激 机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同 抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的 混合物～。 2、单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAb）：由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体。高度均一、特异性强、效价高、少或无交叉反应性。 Ab1 Ab3 Ab4 单克隆抗体 抗原 Ab1 抗血清 Ab1 Ab2 Ab3 Ab4 Ab2 Ab3 Ab4 普通抗血清（多克隆抗体） 脾 B细胞 骨髓瘤小鼠取腹水 骨髓瘤细胞 HAT培养，稀释 单克隆抗体和多克隆抗体产生区别示意图 杂交瘤细胞 + PEG, 融合 Ab2 抗体制备技术 一、多克隆抗体制备 （一）免疫原的制备 （二）免疫动物 （三）免疫血清的纯化 （四）免疫血清的鉴定 （五）免疫血清的 二、单克隆抗体制备 （一）单克隆抗体制备原理 抗体制备技术 （二）单克隆抗体制备的技术要点 （三）影响杂交瘤技术的因素 （四）单克隆抗体的应用 三、基因工程抗体技术 （一）人源化抗体 （二）小分子抗体 （三）双特异性抗体 （四）抗体库技术 一、多克隆抗体制备 （一）免疫原的制备 免疫原（immunogen）指能刺激机体免疫系 统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原最 重要的性质是免疫原性（immunogenicity） 免疫原—天然抗原、人工或合成抗原； 蛋白质、多糖、脂类、核酸抗原； 具体制备—细胞性抗原、可溶性抗原、半抗 原性抗原和免疫佐剂～ 1、细胞性抗原制备： 绵羊红细胞（SRBC）- 溶血素； 细菌- 抗菌抗体（动物免疫血清） 2、可溶性抗原制备： 指蛋白质、多糖和脂类等。作为免疫原需要由细胞的破碎、提取与纯化～ 1）细胞的破碎（物理法、化学法） 2）提取与纯化： ①超速离心分离—是一种根据分离物质的比重特点，通过差速或梯度密度离心，将分子大小不同的抗原颗粒分开的方法，只适宜少数大分子物质的分离。 ②选择性沉淀—选择某抗原理化特性，采用相应沉淀剂或溶液环境～例50%饱和硫酸铵盐溶液可沉淀析出学清球蛋；8%