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Sanger测序法的原理
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1977年,英国人Fred Sanger 发现,如果在DNA复制过程中掺入ddNTP,就会产生一系列末端终止的DNA链,并能通过电泳按长度分辨。
不同末端终止DNA链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。
由此诞生了以Sanger命名的测序原理即双脱氧链终止法测序原理。
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5′磷酸
3′羟基
3′,5′ -磷酸二酯键
核苷酸形成3?,5?-磷酸二酯键示意图
核酸序列形成的基础
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“双脱氧末端终止”的含义
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dNTP
终止物标记方法
因为颜色不同,4种终止物可以在一起进行反应。
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测序反应与PCR的比较
PCR 测序反应
DNA 聚合酶 Taq酶 测序酶
引物 一对 单向
底物 dNTP dNTP+ddNTP*
模板 量少 质量要求高
产物 等长的DNA片段 相差一个碱基的一系l列片段
荧光标记 无 3’端带荧光标记
测序产物 指数扩增 线性扩增
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3730xl测序仪的构造
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遗传分析仪系统组成
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电脑及软件
耗 材
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1 电进样及电泳
1. 毛细管和电极深入样品溶液中
2. 加电压
3. 荷负电的DNA分子进入毛细
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