实验二酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定霉菌的形态观察.doc

新乡医学院教案首页授课教师姓名： 授课题目 授课对象 时间分配 min）； 实验步骤与操作（15 min）； 实验注意事项（5min） （2）实验操作部分：学生实验操作练习（90 min） 课时目标 1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 授课重点 授课难点 授课形式 授课方法 参考文献 思考题 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 教研室主任及课程负责人签字 教研室主任（签字 ） 课程负责人（签字） 年 月 日 年 月 日 新乡医学院教案 单位: 生命科学技术系发酵工程教研室 ：实验酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定实验目的 1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式 2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 二、实验原理 酵母菌酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。通过美蓝染液水浸片水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，观察酵母细胞形态鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。三、试剂与器材 1.材料 2.试剂吕氏碱性美蓝染色液 3.器材 显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。 四、实验内容 1.美蓝浸①制片：载玻片中央滴加一滴0.1%美蓝染液，无菌操作下用接种环挑取少许酵母菌置于染液中，混合均匀； ②染色：用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上，染色3min； ③镜检：用低倍镜和高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据颜色区分死活细胞； ④30分钟后再镜检 2.霉菌---乳酸石炭酸棉蓝直接压片法观察 ①用牙签从霉菌琼脂平板培养物取下一块薄薄的琼脂块（要薄些），②50%酒精溶液中洗去脱落孢子③使用牙签将霉菌培养基放于载玻片上，加盖玻片④手指用力均匀按压2-3次，使霉菌平铺载玻片上，取下盖玻片，将培养基碎块挑出⑤滴加一滴棉蓝染液，加盖玻片吸水纸吸取多余染液⑥镜检：用低倍镜和高倍镜观察霉菌的形态五、关键步骤及注意事项 染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。 用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。六、思考题1.绘制高倍镜下酵母菌和霉菌的形态特征图； 2.30分钟后，酵母菌死活细胞的变化并分析原因。 出芽繁殖：是酵母菌的主要无性繁殖方式；出芽繁殖的过程是在成熟的酵母菌细胞表面，向外突出形成芽体，然后部分核物质和细胞质进入芽体内。当芽体长到一定程度时，两细胞之间形成横壁，随后脱离母细胞，成为独立的新个体。如易变裂殖酵母，当细胞长到一定大小时，核分裂为二，接着形成隔膜将细胞分开，成为两个。