中断杂交试验作图.ppt

F因子及其在杂交中的行为 * 期中考试安排 (三)、中断杂交试验作图 雅各布(Jacob，F)和沃尔曼 (Wollman，E.)在五十年代设计了一个著名的中断杂交试验(interrupted mating experiment)。他们采用的菌株基因型为： Hfr:thr+leu+aziStonSlac+gal+strs F–: thr–+leu–+aziRtonRlac–gal-strR 这里，thr、leu、lac、gal分别代表苏氨酸、亮氨酸、乳糖和半乳糖，+代表原养型或发酵型，–代表营养缺陷型或不发酵型；azi和ton分别代表叠氮化纳和T1噬菌体；Str表示链霉素，r代表抗性，s代表敏感。 中断杂交试验作图 将两种细胞混合培养，每隔一定时间取样，把菌液放在食物搅拌器内搅拌，以中断接合。 将中断接合的细菌接种到含有链霉素的几种不同培养基上，测定形成了什么样的重组体(链霉素可杀死所有的Hfr供体细胞)。 中断杂交试验作图 结果表明，thr+最先进入F-细胞，接合8分钟后便出现了重组体，leu+随后半分钟出现，aziS在9分钟时出现等等。 在被选择的thr+leu+的重组体中，其它的供体基因接连出现，不同的基因经过一定时间就上升到一个稳定的水平。 中断杂交试验作图 中断杂交试验作图 在检查F- 细胞是否得到thr+，可用不加thr而含str、leu的培养基，在这里，只有thr+strR才能生长，能长的细胞就是供体thr+已经进入受体并发生了重组的细胞。试验结果列于表。 中断杂交试验作图 上述事实说明，Hfr菌株的基因是按一定的线性顺序依次进入F–菌株的，染色体从原点以直线方式进入F–细胞。基因位点离原点愈近，进入F–细胞愈早，反之则晚。 根据中断杂交的实验，用Hfr基因在F–细胞中出现的时间为标准，可以作出大肠杆菌的遗传连锁图。 8 8.5 9 11 18 25 gal 中断杂交试验作图 用不同的Hfr菌株进行中断杂交实验所作出的大肠杆菌基因连锁图，其基因向F-细胞转移的顺序大不相同。 中断杂交试验作图 初看起来，似乎每个菌株的基因转移顺序有所不同。其实，转移的顺序并不是随机的。 例如，所有的his基因都有gal在一边，gly在另一边。其他基因也是如此，除非它们在连锁群的另一端。 这个实验进一步说明F因子和细菌染色体都是环状的，而Hfr细胞染色体的形成，则因F因子插入环状染色体的不同位置，而形成了不同的转移原点和转移方向。 中断杂交试验作图 中断杂交试验作图 如果两个基因间的转移时间小于2分钟，用中断杂交法所得的图距不太可靠，应采用传统的重组作图法(recombination mapping)。 例如，有两个紧密连锁的基因：lac+(乳糖发酵)和ade– (腺嘌呤缺陷型)，为了求得这两个基因间的距离，可采用Hfr lac+ade+×F–lac–ade–的杂交实验。 用完全培养基但不加腺嘌呤，可以选出F–ade+的菌落。由于ade进入F–细胞的顺序较lac为晚，因此，lac–自然也已经进入。如果选出 ade+，同时也是lac+，lac–ade间没有发生过交换；如果是lac–，说明两者之间发生过交换。 中断杂交试验作图 基因的重组 两基因间的重组频率是 22%。 但这两个位点间的时间单位约为1分钟，可见1个时间单位(分钟)大约相当于20%的重组值。用重组频率与中断杂交法所测得的基因距离是大致符合的。 三、性导(sexduction)与F?因子 性导(sexduction)是指接合时由F′因子所携带的外源DNA转移到细菌染色体的过程。 F因子整合到宿主细菌染色体的过程是可逆的，当发生环出(looping out)时，F因子又重新离开染色体。然而F因子偶然在环出时不够准确，它携带有染色体的一些基因。 阿代尔伯格和伯恩斯(Adelberg，E. 和Burns，S.，1959)称这种F因子为F′因子。 性导(sexduction)与F?因子 F′因子使细菌带有某些突出的特点： 第一，F′因子以极高的比率转移它的基因，如同F +细菌以极高的比率转移它的F +因子一样； 第二，F′因子有极高的自然整合率，而且整合在一定的座位上，因为它有与细菌染色体的同源区段。 性导(sexduction)与F?因子 性导在大肠杆菌的遗传学研究中十分有用。 第一，不同的F′因子带有不同的细菌DNA 片段，利用不同的F′的性导可以测定不同基因在一起转移的频率。 其次，观察由性导形成的杂合部分二倍体中某一性状的表现，可以确定这一性状的等位基因的显隐关系。 第三，性导形成的部分二倍体也可用作互补测验，确定两个突变型是同属于一个基