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AOCS---毛细管柱气液相色谱法测定精炼 植物油、氢化油和脂肪中的顺、反式脂肪酸 简介： 利用气液相色谱测定植物油和脂肪的方法，能够优化鉴别方法，并且能够定量反式脂肪酸异构体，由于样品中脂肪酸甲酯的链长、饱和度和不饱和度、双键和位置几何学的关系，它们在气液相色谱毛细管柱中有较高的极性稳定相，所以往往要准备的是脂肪酸的甲酯化。 视野： 此方法是利用气液相色谱毛细管柱测定分离植物油和脂肪在高温精炼和氢化时，反式异构体变化的程度；此方法也能够用来测定其它的脂肪酸，如：利用同一个样品和同样的分析方法获得饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。 一、仪器： 气相色谱-----配备有毛细管柱进样系统（最好是分流进样模式） FID检测器（进样口温度250℃，检测器温度250℃，柱温条件见表一， 上述不同条件的结果见图1-5） 毛细管柱-----具高极性稳定相，如以下其一： CRM-SH88 50m * 0.25mm LD * 0.20um file SP2340 40m * 0.25mm LD * 0.20um file BPX-70 50m * 0.22mm LD * 0.25um file ( SGE INC AUSTRA TEXAS USA ) 相应工具 电子积分仪或色谱软件 TABLE 1 建议用最适宜的气液相色谱条件测定并量化精炼油和脂肪的反式异构体 柱子类型 SP2340 CRM-SH88 BPX-70 温度条件 192℃ 175℃ 198℃ 柱头压（kpa) 125 130 155 载气的线性速率(He) 15cm/sec 19cm/sec 17cm/sec 二、试剂 除非特殊说明，试剂要求依据ISO 6353 （第2、3部分） 或者依据ISO 3696 分析纯级 水： 三级以上要求 载气： He、N2、H2 要求氧气被滤掉且干燥的载气。 三、步骤 样品准备 利用三氯化物的方法将植物油和脂肪中的甘油三酯甲酯化。 甲酯化前，样品混合均匀，固体样品应该先熔化以保证充分混合。 色谱分析 设定气相色谱的柱温，调节平均载气速率（Table1），同时分流比近似为1：100 从准备好的样品中吸取0.5-1ul的甲酯溶液（浓度近似为7mg/ml），注入气相色谱中，与示例中的色谱结果进行比较（图1-5），如果分离的结果与示例中的结果不一致，在柱温上作一点小小的改动可能会好点，如程序性升高或降低柱温1℃直至得到好的分离结果。在柱子和设备温度控制上，这些改动是必须的，而且这些改动应该在少许温度范围内（正或负）。如果柱温上升，20：1 顺式异构体的峰值会比18：3 ccc 提前出来。 性能控制 如果气液相色谱系统安装正确，精炼油eg豆油的18：1 11c异构体几乎和 18：1 9c异构体的峰值分离结果挨的很近，2个18：1 顺式异构体应该清晰的分离。 精炼油中上一个峰18：3 反式异构体（t,c,c）和18：3 ccc(lindenic acid)峰值之 间20：1 天然异构体应得到精确分离。 c、 在精练油中，一个小峰值18：1 反式异构体，2个近似相等的位置18：2 反 式异构体和4（或5）18：3异构体应该得以分离。 对于部分氢化油和脂肪来讲，18：1 13反式和18：1 9顺式异构体在色谱图上可以分离。 峰值鉴定 对于高温精炼油和脂肪，反式异构体在数量上是有限的，因为在同一位置上的双键，只有几何异构体才能形成。对于C18脂肪酸这些特殊的异构体：18：1 9t 、18：2 9c12t、18：2 9 t12c、18：3tct、18:3cct 、18:3ctc 、18:3tcc等12-15种异构体（在一些样品中，18：2 9 t12t 和18:3ttc异构体只有很少的量。） 对于部分氢化油和脂肪，存在异构体的反式双键可以利用相当链长（ECL）的概念来鉴别。（TABLE 2）利用此系统精确的峰加以分离，相当链长（ECL）值必须通过精确的反式和顺式脂肪异构体标准试剂进行适当校准后才可以。 结果的计算和延伸 校正每个峰的面积，对每个组分作出响应的FID进行补偿，FID的修正是由脂肪酸甲酯的分子量进行计算的，如下： FIDt = MWt (Nt-1)(Awc)(FID16:0) FIDt ：组分x的FID 因子 MWt ：组分x的分子量