2012版血液病实验室各项操作SOP文件.doc.doc

血液科实验室各项试验操作SOP文件 目录 瑞氏染色 铁染色 过氧化物酶染色POX 过碘酸－雪夫反应PAS 碱性磷酸酶染色NAP α-醋酸萘酚酯酶染色NAE－NaF 苏木素－Giemsa－酸性品红染色HGF Gomori网状纤维染色 Masson胶原纤维三色染色 免疫组化 血小板抗体检测 血浆鱼精球蛋白试验3P 血浆优球蛋白溶解试验 酸化血清溶血试验Ham 血清糖水溶血试验 红细胞渗透脆性试验 高铁血红蛋白还原试验 瑞氏染色 【原理】 瑞氏染液是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料,溶于甲醇后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。伊红为酸性染料，将细胞质染成红色通过染色，将生物组织浸入染色剂内，使组织细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色，产生不同的折射率，以便观察。 瑞氏染液的配制：瑞氏染料1g、甲醇500ml。将染料置于洁净研钵中，加少量甲醇研磨，研磨片刻使其溶解，将已溶解的上层染液吸出保存；对未溶解的染料再加入少量甲醇，继续研磨，再吸出上液，如此连续几次，直至染料溶完，甲醇全部用完为止。收集的染液置棕色玻璃瓶中备用。 瑞氏一姬姆萨复合染色液的配制：取瑞氏染粉1g、姬姆萨复合染粉0.3g，甲醇500ml。具体操作同瑞氏染液配 蒸馏水 【操作】 1、?取涂片自然干燥?2、?滴加瑞氏染液染1分钟,使标本被其中甲醛所固定?3、?加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻玻片,静置4、?水洗、吸干、镜检。 光学显微镜下，瑞氏和姬姆萨染色细胞形态学的基础 【原理】 骨髓小粒中的含铁血黄素和幼红细胞内的铁与酸性亚铁氰化钾溶液发生普鲁士蓝反应，生成蓝色亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位 【材料】 酸性亚铁氰化钾溶液 200 g/L亚铁氰化钾溶液 5份（0.5ML） 浓盐酸 1份（0.1ML） 取200 g/L 亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓慢滴加浓盐酸，边滴加边摇匀，待烟雾消失后，过滤备用 2 g/L核固红－硫酸铝溶液 取硫酸铝2 g溶于100 ml蒸馏水中，再加核固红0.2 g。置于37 度水育1 h并随时振荡，使溶解，过滤备用 【操作】 干燥涂片用甲醛固定10 min，待干 玻片上滴满酸性亚铁氰化钾，37度染色30 min 蒸馏水冲洗后，核固红染液复染10～15 min 流水冲洗，待干镜检 【注意事项】 骨髓取材一定要满意，外铁一定要有骨髓碎片块或颗粒，取材不佳，影响结果准确 酸性亚铁氰化钾溶液须新鲜配制 【结果】 幼红细胞核呈鲜红色，浆呈淡黄色，铁粒呈蓝绿色 细胞外铁 用低倍镜下观察涂片，特别是涂片尾部附近的髓小粒，注意翠蓝色颗粒的存在，可分为五级标准 （－）： 无颗粒 （＋）： 有少数铁颗粒或偶见铁小珠（颗粒体积大于嗜酸性粒细胞的颗粒者称为铁珠） （＋＋）： 有较多铁颗粒和小珠 （＋＋＋）： 有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状 （＋＋＋＋）： 有极多铁颗粒、小珠，有很多的小块，密集成堆 细胞内铁 用油镜计数100个中、晚红细胞，记录胞质中含铁蓝色颗粒的细胞（铁粒幼细胞）的百分率。 环形铁粒幼细胞 环形铁粒幼细胞的标准为含铁粒在6个以上，其中1/3 以上的铁粒围核成完全或不完全性环行 【参考值】 细胞外铁 ＋～＋＋ 细胞内铁 19～44％ 所见铁粒较细而浅染，散在分布；环状铁粒幼细胞不见 【临床意义】 鉴别缺铁性贫血和某些溶血性贫血 缺铁性贫血时，骨髓细胞内、外铁显著减少或消失，经铁剂治疗后细胞内、外铁可迅速增多，此检查是诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的一种辅助方法 非缺铁性贫血，如溶血性贫血、巨幼红细胞性贫血等病人的细胞外铁可增高，因此有助于鉴别缺铁与非缺铁性贫血 用于诊断铁粒幼细胞性贫血 能找到数量不等的环形铁粒幼细胞，可见粗颗粒状的铁粒幼细胞。环状铁粒幼细胞大于15%支持铁粒幼细胞性贫血 【评价】 铁染色是检查骨髓中贮存铁最有效和简便的方法，结果可代表全身贮存铁情况，是诊断缺铁的重要指标之一。骨髓可染铁减少或消失，则可提示缺铁性贫血 过氧化物酶染色POX （一）氧化WG-KI法 【原理】 细胞质内的过氧化物酶将底物H2O2分解产生新生态氧，后者与KI（碘化钾）作用产生碘，碘与WG等显色剂中的有效成分结合，形成有色颗粒定位于细胞浆中。 【材料】 快速染液A(A液)：主要成分曙红 快速染液B(B液)：主要成分天青 碘化钾溶液（C液）：主要成分碘化钾 WG溶液（D液）：瑞姬氏染料 【操作】 本法采用滴染法，滴染工作液配制（1份滴染工作液为2.4ml）： 使用器材：一次性塑料试管、微量移量液器，一次性吸嘴、滴管。 操作：取C液2.0ml，D液400ul，混匀，2小时内使用。 染色步骤： 快速染色（核染色）：