食用菌母种制作-实验一资料.docVIP

实验一 食用菌母种制作 一、目的要求： 1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理； 2、掌握母种培养基的制备方法； 3、了解无菌操作基本原理掌握母种的无菌接种方法。 5、熟练分离出栽培用菌种。 二、主要仪器设备及药品材料： 灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。 三、实验步骤与方法: ①培养基的制作 1 PDA培养基配方 马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升. 2. 母种培养基的配制 (1)熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。四层纱布过滤于量杯中。滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。补足水量至1000毫升。 (2)分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。 （3）捆把。7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。 （4）灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。 （5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。 ①菌种分离与培养 （1）种菇选择。选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。 （2）母种分离（组织分离法）。在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。 四、实验结果 每人制作平菇母种一支。记录母种菌丝的生长情况。 五、作业 1.食用菌菌种分离有哪些方法？实际生产中最常用的方法是哪一种？该方法有何优点？ 2.组织分离法制作母种成功的关键是什么？在操作中如何避免母种制作失败？ 实验 食用菌原种制作技术 目的要求： 1、了解原种培养基的配制原理及过程； 2、掌握原种的制作方法。 重点与难点: 重点: 母种培养基制作过程; 无菌操作 难点: 食用菌组织分离法制作菌种. 教学方法与手段: 本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。 实验内容 1、按比例计算、称取各组分； 2、添加、混合均匀各组分； 3、培养料水分、pH调节、装袋； 4、原种培养基灭菌； 转接、培养原种。、主要仪器设备药品材料： 灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、原种瓶、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种。 实验 食用及药用菌栽培种制作技术 目的要求： 1、了解栽培种培养基的配制原理及过程； 2、理解好的栽培种培养基对生产的重要性； 3、掌握水在配料中的作用； 4、掌握栽培种制作技术。 重点: 栽培种培养基的配制原理及过程 栽培种制作技术 难点: 水份含量的掌握. 教学方法与手段: 本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。 实验内容 1、按比例计算、称取各组分； 2、添加、混合均匀各组分； 3、培养料水分、pH调节、装袋； 4、培养基灭菌； 转接、培养原种 6、 主要仪器设备药品材料： 灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、盆、聚丙烯塑料袋、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种。 实验内容 培养基的制作 配方。棉籽壳78%，麦麸20%，石膏1%。糖1%（料：水=1：（1.2-1.3））。 拌料。根据制种需要，按各种营养成分的配比称量各种原料。然后将棉籽壳和麦麸先混合一起。石膏和蔗糖混溶在拌料的水中，搅拌均匀后，泼洒到棉籽壳上再搅拌均匀。 测培养料含水量。培养料拌好后，用手抓一把培养料握在手中，攥紧，手指缝中有水印但无水滴滴下，这时的含水量合适，为60%-62%，若含水量不足，可再加少量的谁，充分搅拌均匀，再检测，直至含水量合适为止。 装袋。 将拌好的培养料装入聚丙烯塑料袋中，边装边压实，一直装到塑料袋容积的3／5左右。 打孔。装好培炎养料后，从袋中央用锥形木棒打一孔，孔深距袋底部2-3厘米。 封袋口。将塑料颈圈或无棉塞盖体的环套在塑料袋口上，然后将袋口外翻，塞上棉塞或盖上无棉盖体的盖子。棉塞的外面还要包一层牛皮纸，用线绳扎好。擦净塑料袋外面所粘附的培养料。 二．灭菌 由于栽