MTT方法总结.doc

MTT方法总结 1.MTT原理 MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm和570nm处进行比色。所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。 2.优点 （1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素 缺点：影响因素多，重复性较差。MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护 3.步骤(1)接种细胞：用0.25％ 10％RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每 孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO24h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL