石蜡包埋机（paraffinembeddingstation）LeicaEG1150H-SIBCB.doc

石蜡包埋机（paraffin embedding station）Leica EG1150H 操作方法 打开电源开关，按ON/OFF键后，石蜡包埋机开始进入工作状态。其中，机器各部分温度均设为60℃。待蜡箱中的石蜡融化后，开始包埋。 取出预热好的石蜡包埋框，使蜡箱中的熔蜡流入其中，用加热的镊子将浸蜡后的组织块置于包埋框中，正确定位后，盖好包埋框盖子。这些工作均在包埋框内石蜡未凝结前完成。 然后加满熔蜡至包埋框的上边缘，最后把包有组织块的包埋框放置于冷冻台上，使石蜡凝固。在包埋框上做好标记。 石蜡切片机（rotary microtome）Leica RM2235 操作方法 将蜡块按组织大小进行修整，使蜡块的上下两边平行，避免切片时蜡带弯曲。 将修整好的蜡块固定到切片机的标本夹上，把刀片固定到刀架上并固定刀架。 调整蜡块的切面，使其与刀口垂直平行。调整刀架与标本夹头上蜡块的距离，使蜡块平面与刀口靠拢，调整修片厚度为8-10(m，然后右手握转轮手柄，力量均匀地顺时针方向转动，修整蜡块的切面，待组织块完全暴露时停机。 调整切片厚度。切片厚度一般为4-10(m。 正式切片时，左手平握毛笔，右手力量均匀地顺时针转动手柄，蜡带切出来后，用毛笔轻轻拖起，待蜡带有一定长度后暂停。 右手用镊子轻托蜡带近刀端，左手用毛笔将蜡带轻轻顺刀口挑下，将其正面朝上，平整地摆放好。 将切好的蜡带分段轻轻放入37℃水域中，待蜡带完全平展，左手拿经过处理的载玻片呈一定角度入水，右手持镊子轻拖蜡带于载玻片的1/3处，并及时将其拨正后，置于37℃烤片台上，烘烤过夜，使切片贴牢在载玻片上。 使用完毕后，取下蜡块和刀片，把摇轮盘手柄及时锁住。 振动切片机（vibrating sectioning）Leica VT1000S 操作方法 开机 打开振动切片机的电源开关。 上样 用配套的螺丝刀将样品台卸下，根据样品大小在样品台中间均匀地涂一层502胶，注意502胶不要涂太多，否则影响粘合效果。用洁净的餐巾纸吸干样品表面的溶液，摆好样品位置，粘在样品台上。粘牢后将样品台装回。将刀片安在刀片架上。 调整 在样品槽内注满PBS液。通过“UP/DOWN” 键调节样品与刀片的相对上下位置，刀片要浸没在PBS里。通过“ ”和“REV/FORW”键设定进刀和退刀的上下限。设定切片厚度(FEED)、切片速度(SPEED)和刀片的振幅(FREQ)。振动切片的厚度一般比冰冻切片和石蜡切片要厚。切片越薄，振幅应越低。 切片 按下“START/STOP” 键开始切片。“SINGLE/CONT” 键分别是单次切片和连续切片，可根据需要选择。“PAUSE”键暂停。可用切片机的放大镜和配备的LEICA CLS 100X照明系统观察切片状态。切下一片切片后，用小毛笔、镊子或粗口吸管将切片移入盛有PBS液的培养皿或培养板内。若要保存一段时间，PBS内应加0.05% NaN3，并储存于4℃。 结束 切片结束后，将刀片及样品台卸下，将剩余的样品及502胶刮下，将槽内PBS液倒掉。擦干样品槽，装回样品台，关闭电源开关。 冰冻切片机（Leica CM 3050） 贴片 翻开防卷板，轻轻用毛笔抚平切片，将经过处理的载玻片以一定的角度迅速地贴起切片。 关机 切完样品后，将样品取下。清洁展片台和防卷板，清洁箱体。锁好转轮手柄。将“CT”设为-10℃，“OT”锁上，关箱体照明灯。然后长按lock键关机。 图 1: 操作界面1说明 图 2: 操作界面2说明