GB4789.40坂崎肠杆菌检验2010.0703选编.ppt

本标准与GB/T 4789.40-2008 相比，主要变化如下： ——修改了标准的中英文名称； ——删除了附录A 中A.3。 SN第一部分：分离与计数方法 第二部分：PCR方法 第三部分：荧光PCR方法 选择性增菌肉汤的选择 FDA方法选择EE肉汤，ISO方法选择mLST-Vm，即在LST中加入Nacl和Vm。本标准使用mLST-Vm。 EE肉汤适合所有肠道菌群的生长繁殖，这就可能对ES的生长产生竞争性抑制作用，降低检出率。 研究证明与其他肠杆菌科细菌（如沙门氏菌，大肠埃希氏菌等）相比，ES具有较高的耐渗透压能力。加入0.5M的Nacl在保证ES良好生长的同时，可以有效地抑制上述其他细菌的生长。 Vm可有效地抑制G+菌的生长。而较高的生长温度可以进一步抑制其他细菌的生长。 * * * 显色培养基的选择性较好 DFI对ES的选择性较好，ES形成的蓝绿色特征性菌落易于辨认，而且： 硫化氢指示剂可以区分ES和产生少量α-葡萄糖苷酶但H2S阳性菌株（如普通变形杆菌）。 ES都可以在DFI平板上生长并产生蓝绿色菌落 其他常见菌在DFI平板的菌落颜色 白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希氏菌、泛菌属的多种菌等 黄色菌落：赫氏埃希氏菌 黑褐色、粉色或中心蓝绿菌落：少量菌种 ESIA:蓝色，1-3mm * 二、食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验 * 本标准修改采用 ISO/TS 22964 （ 1st edition 2006-02-01 ）Milk and milk products — Detection of Enterobacter sakazakii FDA July 2002; Revised August 2002 Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula * 第一法：阪崎肠杆菌的检验第二法：阪崎肠杆菌的计数 * 第一法 阪崎肠杆菌的检验 * 阪崎肠杆菌检验程序 报 告 生化鉴定 挑取黄色菌落 DFI琼脂 36℃±1℃，24 h±2h 挑取蓝绿色菌落 1mL + mLST-Vm 10mL 44℃±0.5℃，24 h±2h 检样 100 g（mL）+BPW稀释液 900 mL 36℃±1℃，18 h±2h 前增菌 选择性增菌 选择性分离 生化鉴定 100 g（ mL ） 5.1 前增菌和增菌 左图：未混合； 右图：混合后。 * 加样入已预热到44℃的BP中 5.2 分离 DFI 36℃±1℃ 24 h±2h * TSA： 25 ℃培养后 典型ES：黄色 阴性对照E. coli ATCC 25922：白色菌落 * 黄色素 5.3 鉴定（生化反应） * 商业生化鉴定系统的应用 推荐使用的ES生化鉴定方法有很多，主要有API 20E，ID 32E，Biolog GN2 MicroPlate，VITEK GNI+等。 上述方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组织的标准采用。 在肠杆菌的生化鉴定中使用最广泛的是API 20E和Vitek GNI+。 * API 20E生化鉴定板典型生化反应图示 * VITEK-GNI+ * 质量控制 选择标准菌株作为阳性对照，检测增菌液和分离培养基对阪崎肠杆菌生长的影响和生化鉴定结果，对整个实验的操作过程进行质量控制。 * 第二法 阪崎肠杆菌的计数 * 3管MPN法 * SN标准 谢谢大家！ * * * * * * * * DFI：蓝绿色 ESIA：蓝色 RF ：蓝黑色（杂菌、纯菌） NA+?-MUG：正常光线下形成鲜黄色菌落，紫外线下显示蓝/紫色荧光。 * * * * * * 中国CDC营养食品所 * * 中国CDC营养食品所 * 中国CDC营养食品所 * 中国CDC营养食品所 * 中国CDC营养食品所 * 中国CDC营养食品所 * 中国CDC营养食品所 * 中国CDC营养食品所 * 中国CDC营养食品所 * * * * * 阪崎肠杆菌检验 GB4789.40-2010 Enterobacter sakazakii(ES) * 内　容 第一部分：一般特征 第二部分：流行病学特征 第三部分：ES的检验 * 第一部分：一般特征 命名 培养特征 生化反应 抵抗力 增殖能力 致病性 * 1980年之前一直被称为黄色阴沟肠杆菌。 DNA-DNA杂交 生化反应 黄色素 抗生素敏感性 * 一、命名 二、培养特征 G－无芽孢杆菌，兼性厌氧，在6℃-47℃范围内均可生长，适温35-37℃ 营养要求不高： VRBGA、TSA、NA、MAC、EMB