血细胞形态学操作规程.docVIP

血细胞形态学检验操作规程 1 检验目的 保证血细胞检查结果准确性，提供正确的细胞形态学信息，提高工作效率，为临床诊断提供依据，为临床治疗方案提供依据，以2005年国际血液学复检专家组推荐的41条规则为基础，建立适合本实验室使用血细胞分析仪器的复片规则 2 标本采集 2.1 毛细血管采血法：选用手指采血，采用WHO推荐采血部位以左手中指或无名指尖内侧为宜；采血时轻轻按摩采血部位，使中指或无指尖自然充血，消毒局部皮肤后，操作者用左手拇指和食指适度捏紧刺血部位，右手持消毒采血针自指尖内侧迅速刺入2-3mm，以稍加挤压血液能流出为宜，采血至事先配好的以EDTA-K2抗凝的小试管（约含EDTA-K21.0mg）中或直接推血片检查。 2.3 静脉采血：采用进口专供医学检验使用的真空采血管，真空管色泽为紫色，抗凝剂选用EDTA-K2，要求血中EDTA-K2终浓度为1.5～2.2mg/ml。 3 血涂片的制备和处理 3.1 血涂片的制作 a) 将血标本一滴置载玻片的一端，以推片一端从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持25°～30°的平面夹角，平稳地将血向前推动使血液即在载玻片上形成一薄层血膜，将制成的血膜在空气中挥动，使迅速干燥，以免血细胞皱缩； b) 手工血涂片要求厚薄适宜，头体尾分明，边缘整齐，两侧应留有空隙； c) 血涂片标本迅速干燥后用瑞氏-姬姆萨（Wright-Giemsa）复合染液进行染色，要求染液和缓冲液比例合适；所加染液不能过少；冲洗时不可先倒染液，应以流水从一端缓缓冲去；染色过深或过浅应进行复染。 3.2 血涂片的染色 3.2.1染色试剂 染液名称：瑞氏-姬姆萨（Wright-Giemsa） 主要成分 ( a ) 瑞氏-姬姆萨A溶液：瑞氏染料、姬姆萨染料 2vials×250ml ( b) 瑞氏-姬姆萨B溶液：磷酸盐缓冲液 2vials×250ml 3.2.2 染色原理：瑞氏-姬姆萨染色液主要应用于血液和骨髓涂片染色，它是利用Romanowsky Stain技术原理改良而成的。细胞的着色过程是染料透入被染料物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对瑞氏-姬姆萨染色液中的酸性染料（曙红）和碱性染料（亚甲蓝）的亲和力也不一样。因此，标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨其形态牲的目的。红细胞呈淡红色，白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。 3.2.3 试剂的稳定性：瑞氏-姬姆萨染色液应存于相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的室温环境，有效期二年。 3.2.4 染色步骤 a) 涂片制成后，用蜡笔在血膜两头划线，然后将血片平放在染色架上； b) 滴加瑞氏-姬姆萨A溶液（约0.5-0.8ml）于涂片上，覆盖整个血膜，染色约1分钟； c) 滴加瑞氏-姬姆萨B溶液于A液上面（滴加之量为A液的2倍至3倍，以洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混匀，染色3～10分钟； d) 用清水冲去染液，待干后用油镜镜检。 3.2.5 标本保存：将需血细胞形态学检查的患者编号用记号笔写在玻片上，镜检完标本保存在玻片盒中一周。 4 血细胞形态学的显微镜复检规则 4.1 SYSMEX血细胞分析仪涂片复检规则 4.1.1 WBC、RBC、Hb、PLT、RET超过检测线性：WBC＞100×109/L、RBC＞8.0×1012/L、Hb＞200g/L、PLT＞1000×109/L、RET＞23%；复检要求：稀释标本后重新测定。 4.1.2 WBC、RBC、Hb、PLT无结果或结果不全；复检要求：检查标本是否有凝块；重测标本。 4.1.3 WBC＜3.0×109/L或WBC＞30×109/L；复检要求：涂片镜检。 4.1.4 PLT＜60×109/L或PLT＞1000×109/L；复检要求：涂片镜检。 4.1.5 Hb＜70g/L或Hb＞180g/L；复检要求：确认标本是否符合要求；重测标本和涂片镜检 4.1.6 MCV＜75fl或＞105fl（成人）；复检要求：涂片镜检。 4.1.7