一种坛紫菜新细菌病害的研究.pdfVIP

叠硅l亿 第三屠毒洋生物高技术论坛 200s．髓。19-23 一种坛紫菜新细菌病害的研究 严兴洪+，周晓，李琳，陈俊华 (上海水产大学，农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室， 上海高校水产养殖学E．研究院，上海200090) 摘要：本文以采自福建省平县牛山岛海区的天然坛紫菜叶状体为研究材料，对其发生的腐 烂病进行了研究。显微镜检查发现腐烂洞四周的死细胞多数呈铁锈红色，内物质溶出，细胞 体积变小，成拉长的多角形，少量死亡细胞变绿或发白。将患病叶状体与室内培养的健康坛 紫菜叶状体进行共培养，数天后，健康叶状体上亦出现相同的腐烂病症，初步确认此病的病 因不是生理或生态因素，而是由于病原菌侵入引起的。从患病叶状体进一步分离出拟病原菌， 用其对健康叶状体进行回感试验，三天后，健康叶状体上出现腐烂症状，证实分离到的细菌 为病原菌。该病原茵有较弱的消化琼胶和分泌毒素的能力。病原菌培养液经高压灭菌或沸腾 处理后，毒性反而进一步增加。健康坛紫菜叶状体在上述两种处理后的毒素液中培养48小 时，紫菜细胞几乎全部被杀死变成铁锈红色。此结果初步证实，此病原茵是靠细菌释放内毒 素杀死紫菜细胞。鉴于此病的腐烂症状是使细胞变红死亡，把此病称为坛紫菜细菌性红烂病。 它不同于由于真菌侵入造成的坛紫菜赤腐病，也不同于紫菜绿斑病，因为绿斑病的病理是病 原菌靠外分泌能解离并消化紫菜细胞的酶而杀死紫菜细胞的。 关键词：坛紫菜；叶状体；病原菌；回感；毒素 日lJ舌 坛紫菜是一种营养价值很高的海藻，是我国主要的养殖品种之一。近年来，坛紫菜病害 经常发生，已被报道的叶状体病害有赤腐病，绿烂病【9,10,11,121等。患病坛紫菜被制成千品后， 质量严重受影响，直接降低了市场竞争力【5J。 本文所报道的病害是2004年2月在福建省平堙县牛山岛岩石上生长自然坛紫菜叶状体 发生烂洞，显微镜下观察，发现它与紫菜的绿烂病(图版口．2)不同，死亡细胞大部分呈变形的 铁锈红色，并逐步褪色至白色，是一种新的病害。本文对此病烂的病症病原菌分离，病理等 作了初步研究，观察结果报告如下： +资助项目：国家高科技研究发展计划(863汁划)资助项目(2002AA603023)，国家自然科学基金资助项目 火学校长基金项目(2001一01) +通讯作者：严兴洪(1958-)，男，浙江义鸟人。博士，教授，博士生导师，主要从事海洋生物生理生态，海藻生 物技术和遗传育种研究。E-mai i：些Y业墼塾地：2堕坚：塑 647 覆建ln 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19．23 1．材料与方法 1．1试验材料 患病坛紫菜叶状体采白福建省平谭牛山岛海区，从患病紫菜烂洞部分分离出病原菌。 刚于同感染试验和毒素测试的坛紫菜叶状体均为实验室培养的。 1．2试验方法 1．2．1坛紫菜叶状体新病害共培养试验 将自然海区采网的坛紫菜患病叶状体分在两瓶消毒培养液中进行充气培养，并将实验室 培养的止常坛紫菜叶状体放入其中一瓶与患病坛紫菜叶状体共培养，培养三天后，镜检。培 养温度：23。C，光强：22001x，光周期：10L：14D，使用光源为40瓦日光灯。 1．2．2病原菌的分离与纯化 把共培养试验中被感染的叶状体上滴下的海水接种入分离全培养基¨们中分离细菌。待 在分离培养基上长出细菌群落，把微凹的菌落接种在分离培养基，连续两次进行划线分离纯 化，获得纯种菌落。 1．2．3坛紫菜叶状体病原菌回感试验 用直径为10mm的打孔器分别从实验室培养的无病害坛紫菜叶状体取圆盘块10个，分成 两组。加入培养液进行充气培养，在其中的一组中接种适量似病原菌，另一组作为对照组， 在倒置显微镜下观察各叶状体上出现的细胞死亡情况，并记录叶状体上烂洞数目和大小。 1．2．4病原菌的毒素试验 挑取适量的在嘲体培养基长成的细菌，接种到细菌培养液中。培养条件：温度：23℃。 细菌培养五天后出现浑浊。将此细菌培养液的上清液分成四份，分别进行以卜．不同处理：I： 用0．45um细菌滤膜对细菌液进行除菌过滤；I