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ICS65.120 B 46 DB21 辽宁省地方标准 DB 21/T XXXX—XXXX 胶体金免疫层析法快速测定动物尿液中莱克多巴胺的残留 Rapid testing of ractopamine in animal urine by colloidal gold immunochromatographic method （报批稿） 2013.03.08 2013 - XX - XX发布 201 X - XX –XX实施 辽宁省质量技术监督局发布 目次 前言 II 1　范围 1 2　术语和定义 1 3 原理 1 4 材料 1 5 实验步骤 2 6 检测灵敏度 2 7 结果判断 2 8 结果确认 2 前????言 本标准根据GB/T1.1—2009给出的规则进行起草。 本标准由全国移动实验室标准化技术委员会（SAC/TC 509）提出并归口。 本标准起草单位：大连普瑞康生物技术有限公司、沈阳产品质量监督检验研究院、辽宁省标准化研究院。 本标准的主要起草人：李刚、金文实、王安、赵卉、李丹。 胶体金免疫层析法快速测定动物尿液中莱克多巴胺的残留 范围 本标准规定了用胶体金免疫层析检测法检测猪尿液中的莱克多巴胺。 本标准适用于莱克多巴胺免疫胶体金快速检测卡检测猪尿液中莱克多巴胺残留。 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 胶体金免疫层析法(colloidal gold immunochromatographic method) 以胶体金标记抗体检测相应抗原或受体的特异性的免疫诊断。 3 原理 将氯金酸用还原法制成一定直径的胶体金颗粒，并用其标抗体，得到莱克多巴胺金标抗体。以硝酸纤维素膜为载体，利用毛细管作用，滴加在膜条一段的液体慢慢向另一端渗移。在移动过程中，会发生抗原抗体反应，并通过胶体金显色。样品中的莱克多巴胺在移动过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜测试线上包被的莱克多巴胺的结合，使测试线不显色，结果成为阳性；反之，检测线显紫红色，结果为阴性。 图1 胶体金免疫层析检测卡结构示意图 4 材料 4.1 莱克多巴胺免疫胶体金快速检测卡 4.2 塑料吸管 5 实验步骤 5.1 样品制备 尿液：滴加3滴（约120uL）尿液可直接进行测试。（建议使用新鲜的尿液，尽量避免结冰解冻再测，使用时需回温至室温后使用。尿液样本可在2-8℃保存48小时，若长期保存时，装在离心管中冷冻于-20℃。） 5.2 测定 5.2.1 打开包装，取出检测卡。 5.2.2 使用塑料吸管吸取置备好的尿样，滴入3滴（约120uL）于样品垫上，等待样本上升至测试区中。（注意：不可以将样本直接滴入测试区中，以免影响到判读结果。） 5.2.3 等待8分钟后即可判断结果。 6 检测灵敏度 本方法在猪尿液中莱克多巴胺的检测限为3ng/mL。 7 结果判断 a)阴性反应（莱克多巴胺含量＜3ng/mL），在判读区内，T线、C线同时出现紫红色的条线,见图2。 b)阳性反应（莱克多巴胺含量≥3ng/mL），在判读区内，C线出现紫红色条线，T线不显色，见图3。 c)失效反应，若C线（上线）完全没出现，则表示测试失败，见图4。 图 2 阴性反应 图 3 阳性反应 图 4 失效反应 8 结果确认 阳性样品应用高效液相色谱质谱法（LC/MS）方法进行确认。 _________________________________ DB21/T XXXX—XXXX I