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专业知识
病理解剖的意义:收集病理教学机科研资料的一个重要途径,大量病理资料的积累促进了医学的发展与进步。通过解剖尸体观察和发现死者器官、组织的病理变化,找出主要病变,分析判断直接死亡原因的一种重要方法。可以验证临床诊断的正确性及治疗效果,发现临床诊断和治疗上存在的问题,最后通过临床病理讨论会的形式,实现病理和临床的交流与统一。
病理解剖室的清洁与消毒
地面及靠近地面的墙壁用水冲洗干净。紫外线灯进行空气消毒,照射剂量不小于9000Uw-s/cm2。室内温度不低于20度,相对适度不超过50%,照射20~30分钟。必要时喷雾2%过氧乙酸8ml/m2密闭消毒30分钟。
解剖器械的消毒 清水冲洗干净,浸泡在1:1000苯扎溴铵内含0.5%亚硝酸钠溶液中4~6小时、10%甲醛水溶液中2~4小时。
个人防护
戴橡胶手套,外再戴薄质纱手套,戴上口罩、帽子,穿手术衣,外戴塑料围裙。
固定
将组织浸入某些化学试剂,是细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置。
意义是保存组织细胞的抗原性,使抗原物质不发生弥散和抗原性丧失。
作用:保持细胞与生活时的形态相似、保持细胞内特殊的成分与生活状态时相仿、便于区别不同组织成分、有利于切片、固定剂的不良影响(影响常规染色、固定造成物质损失、组织皱缩)。
固定剂的选择
细胞内物质与固定剂的关系:组成细胞的主要成分为蛋白质、脂类、糖类,根据研究目的的不同选择不同的固定剂。Masson染色,甲醛升汞、Zenker液、bouin液。嗜铬细胞,含铬的固定液。细胞内糖原,用Carnoy液。
固定液的量(组织块总体积的4~5倍)
穿透力(<2~3mm/24h或0.5cm的多孔疏松组织)
时间(固定24小时后保存于70%乙醇。一般3~24小时)
特殊固定(制备1um厚的半薄切片,先用戊二醛固定再用饿酸进行二次固定)
固定容器(相对大些,防止组织与容器粘连产生固定不良。瓶底垫一棉絮,使固定液均匀渗入组织块。轻轻搅动,利于渗入。)
单纯固定剂
甲醛(40%甲醛气体水溶液,又称福尔马林。)渗透力强,固定均匀,组织收缩小。固定保存大体标本。
甲醛色素:甲醛氧化产生的蚁酸在组织中与血红蛋白结合形成棕色的甲醛色素。
Ⅰ类:醛类,甲醛,戊二醛,多聚甲醛,丙烯醛,已二醛,丙二醛等。
Ⅱ类:氧化剂类,四氧化锇(奥酸),高锰酸钾,重铬酸钾等。
Ⅲ类:蛋白变性类,甲醇,乙醇,醋酸等。
Ⅳ类:其他,氯化汞,苦味酸等。
重铬酸钾:橘红色结晶,有毒性,1%~3%水溶液。固定高尔基体和线粒体。
苦味酸:黄色结晶体,强酸易燃易爆。沉淀一切蛋白质,穿透慢,组织收缩明显,组织无明显硬化。
升汞:针状结晶。5%~7%饱和水溶液。固定蛋白质。
醋酸:保存染色体。
铬酸:三氧化铬的水溶液。0.5%~1%。线粒体和高尔基体。
饿酸:四氧化饿,淡黄色结晶,1%~2%的水溶液,脂类。
丙酮:酶组织化学的各种酶的固定。
三氯醋酸:无色易潮解的结晶体。蛋白质沉淀。
乙醇:80%~95%,糖原的固定。
(1)B-5固定液 淋巴组织 (2)Bouin氏固定液 外科活检标本、结缔组织染色(三色较佳) (3)Carnoy氏液 胞质和胞核,染色体固定佳 (4)Miiller氏液 媒染和硬化神经组织 (5)Orth氏液 胚胎组织、神经组织、脂肪组织 (6)PFG液 肽类抗原的固定,免疫电镜研究 (7)PLP液和PLPD液 富含糖类组织的固定 (8)Rosman液 糖原固定好 (9)Zenker液 固定多种组织,使细胞核和细胞质染色较清楚,常用三色染色 (10)4%多聚甲醛-0.1mol /LPB 适用光镜免疫组化 (11)4%多聚甲醛-磷酸二钠/氢氯化钠液 光镜和电镜免疫组化 (12)甲醛-钙液 脂肪组织和组织化学染色 (13)乙醇-甲醛液 皮下组织肥大细胞 (14)乙醚-酒精液 细胞涂片 (15)中性缓冲甲醛液 免疫组化 (16)中性甲醛液 常用(40%甲醛120ml、蒸馏水880ml、磷酸二氢钠4g、磷酸氢二钠13g。) 组织的脱水和脱水剂
脱水:借某些溶媒置换组织内水分的过程。
酒精 脱水能力强,硬化组织,收缩明显,梯度脱水 丙酮 快速脱水或固定兼脱水 异丙醇 乙醇替代品,收缩小,硬化作用弱 正丁醇 脱水后的组织科直接浸蜡和包埋,电镜中的中间脱水剂 透明:组织块中的水分被溶剂取代,其折射指数接近于组织蛋白的折射指数,组织块变得透亮。
二甲苯:常规透明剂,折射指数1.50,对组织的收缩性强,易使组织变硬变脆。
石蜡切片:组织经石蜡包埋制成蜡块,用切片机制成切片的过程。一般厚度4~6u
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