3分解纤维素的微生物的分离探究.pptxVIP

课题3 分解纤维素的微生物的分离 ㈠纤维素与纤维素酶 1.纤维素 ：一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。 一、基础知识 基本单位： 葡萄糖 分布： 植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。木材、作物秸秆等富含纤维素。 纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。 例1：下列生物能分解纤维素的是（ ） ①人 ②兔 ③牛 ④蘑菇 ⑤纤维杆菌 A.①②③④⑤ B.②③⑤ C.②③④⑤ D.③⑤ C 分解纤维素的生物： 草食性动物 微生物：各种细菌、真菌和少数放线菌 在草食性动物等的消化道内，也共生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维素的能力。 2.纤维素酶 一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维素 C1酶 Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维二糖 3、纤维素酶活性的测定实验： 方法：滤纸崩溃法 ①取二支20mL的试管 实验：纤维素酶分解纤维素的实验 ②各加入一张滤纸条 ③各加入PH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失 讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？ 实验分析：P27的小实验 本实验的自变量是纤维素酶的有无 自变量的操纵方法是：在一支试管中添加适量（1mL）的纤维素酶溶液，在另一支试管不添加纤维素酶，但需加入等量的缓冲液，不能加入蒸馏水，否则会影响溶液的pH。 乙试管滤纸消失原因： 纤维素酶把纤维素分解 甲试管的作用： 对照 ㈡、纤维素分解菌的筛选： 1.方法： 刚果红染色法 2.原理： 刚果红，简称CR，一种染料。可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但是不与水解后的纤维二糖和葡萄糖反应，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 3.优点： 可以通过颜色反应直接筛选 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 纤维素 产生 分解 三、实验设计 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别培养基 挑选菌落 什么样的环境取样? ① 培养的目的? ②选择培养基的特点? 挑选什么样的菌落? ①鉴别培养基的特点? ②如何鉴别? 思考：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？ 课题2：将土样制成的菌悬液直接涂布在选择培养基上 本课题：通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再涂布在鉴别培养基上。 土壤取样 ①取样环境： 富含纤维素的环境中 由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 ②原因 实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 如果找不到合适的环境，还可以将富含纤维素的物质如滤纸等，埋在土壤中，经过30d左右，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。 将滤纸埋在土壤中：人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境，使纤维素分解菌相对聚集。 将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？ 一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。 阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题： ⑴选择培养的目的： 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。(富集培养，浓缩） （2）旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 液体培养基 原因：配方中无凝固剂 （3）这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 有选择作用 本配方以纤维素粉为唯一的碳源，所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。 (4)你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用。 可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照，或者将纤维素粉改为葡萄糖。 选择培养的操作方法： 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。吸取一定的培养液（如5ml），转移到另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。 为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？ 指微生物的种类少了，而某些微生物的数量多了 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应该条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应该条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。 按照课题1的