黄酮类化合物的提取分离.pptVIP

黄酮类化合物的提取分离 一、提取 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，多以苷的形式存在； 在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在； 根据化合物极性不同，溶解性不同，采用不同溶剂提取。 1. 苷元 多用CHCl3、Et2O、EtOAc等极性较小溶剂提取； 对于多OCH3化的成分，用苯、石油醚提取； 对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、羟基黄酮等，用EtOAc、EtOH、Me2CO、MeOH:H2O(1:1)等溶剂提取。 2. 苷类 水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。 3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。 4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮类化合物则应避免。 二、粗提物的精制处理 1．? 溶剂萃取法去杂 石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和非极性苷元。 2．? 碱水提酸沉淀法 适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。 注意事项： ①酸碱度不宜过大 ②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护 ③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂质 3．? 炭粉吸附法 适用于苷类的精制工作。 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。 依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇洗脱，分步收集、检查、合并。 大部分苷类可用7%酚/水洗下，经减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。 4．? 离子交换法 用阳离子交换树脂从水提液中吸附黄酮类化合物，与不被吸附的杂质分离，再用甲醇将黄酮类化合物洗脱。 RSO3-H+ ArOH（黄酮）? 无法交换，故实际上树脂仅起到吸附作用。 三、分离 1. 极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离 常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。 １）聚酰胺层析：主要有聚己内酰胺型(Perlon)、六次甲基二胺已二酸盐(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三种。 其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。 各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为： 水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液。 黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律： ①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷?双糖苷?单糖苷?苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮?具有对位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般是： 异黄酮?二氢黄酮醇?黄酮?黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。 ２）硅胶层析 ①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用 ②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减活性。 2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 胶分子筛分离 主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小?大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大?小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷?糖少的苷?游离苷元（极性小?大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 　　　　　　 ②醇及含水醇 　　　　　　 ③含水丙酮，甲醇－氯仿 ３．利用酸性强弱，采用pH梯度萃取法 混合物溶于有机溶剂，依次用５％NaHCO3、５％Na2CO3、0.2%NaOH、4%NaOH萃取，相应的黄酮类化合物洗脱顺序：7,4’－二羟基?7或4’羟基?一般酚羟基?５－羟基黄酮 ４．根据分子中某些特定官能团进行分离 醋酸铅沉淀法 硼酸络合法：根据具有邻二酚羟基的黄酮与硼酸络合，生成物易溶于水的性质与其它类型黄酮分离。 通常在不与水混溶的有机溶剂如乙醚中，用硼酸液萃取，水相即为邻二酚羟基类黄酮。 举例：从芹菜［Apium graveolens L.］种子中分离graveobiodide A及B