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附肢的发育与再生 脊椎动物附肢发育的诱导作用种类多、互作多，是发育生物学的重要课题。 两栖类幼虫再生现象是再生研究的极好模型。 脊椎动物的附肢 特点：附肢极其复杂而精密。在三个基本轴上是不对称的（上图），但左右前肢呈镜面对称。 起源：由体壁中胚层和外部表皮共同组成。 肱骨（gōng） 尺骨 桡骨（ráo） 腕骨 指骨 孵化10d的完整鸡翅 附肢芽的形成 附肢芽（limb bud）：附肢的原基。 附肢芽形成位置在每一物种恒定，由Hox基因沿A-P（前后）轴表达水平决定。 鸡胚胎的肢芽 孵化3d胚胎侧面出现肢芽 翅芽 腿芽 体节 顶外胚层嵴 附肢场（limb field） 含义：能形成一个附肢的所有细胞。包括产生附肢的中胚层细胞（附肢盘，limb disc）以及形成附肢周围躯干组织和肩带/腰带的细胞。 作用：调节失去或增加部分附肢的能力。附肢场中的每个细胞都能被指令形成附肢的任意一部分。 美西螈的预定前肢场 体节 前肾 鳃 自由附肢 周围躯干组织 肩胛带 雨蛙（Hyla regila）的多附肢蝌蚪 原因：早期后肢场被寄生线虫卵分隔开 提示：附肢场有极强的调整能力 RA处理蝌蚪的尾巴引起肢再生 视黄酸（RA） RA处理促进肢芽的形成 （箭头所指部位） 视黄酸（RA）作用 对肢芽向外生长具重要作用。 RA的前后轴呈浓度梯度，激活同源框基因，促使细胞形成肢场。 RA可引起再生尾中的同源转化现象（homeotic transformation） 。 Hensen’s结可能是产生RA的源泉 附肢早期发育中外/中胚层的相互作用 附肢发育起始于肢场侧板中胚层（肢骨前体）和体节中胚层（肢肌前体）间质细胞的增殖。 体节中胚层细胞沿胚胎长轴的增殖，逐渐在表皮下面形成厚的间质细胞团，影响附肢形成位置。 两栖类胚胎附肢由中胚层起源的图解 FGF10的表达及其在鸡肢发育过程中的作用 附肢芽中预定位置激活的转录因子TBX4和TBX5，分别特化后肢和前肢。 人类TBX5基因缺失导致上肢和心脏异常。 异位表达TBX4，可以使FGF10诱导形成的前肢转变为后肢 TBX4和TBX5在FGF10诱导形成的肢芽中的表达 顶外胚层嵴（AER） 作用： 维持其内侧间质细胞增生能力，使肢体沿P-D（近远）轴曲线生长。 维持肢体A-P（前后）轴线控制基因的命运 与控制肢体A-P和D-V（背腹）轴线的饿因子互作，指导细胞分化。 额外AER 腿中胚层 非附肢中胚层 附肢发育停止 AER退化 附肢发育停止 附肢的向外生长涉及AER和中胚层间持续的相互作用 生长因子FGF-8可以替代顶外胚层嵴 前肢中胚层 顶外胚层嵴 AER缺失 生长因子FGF-8可以替代顶外胚层嵴AER 渐进带PZ：AER内保持了旺盛分裂能力的间质细胞区域，位于肢芽的顶端与AER紧邻的间质组织大约200μm的范围内 前进区 鸡胚趾间细胞的程序性死亡信号可能由BMP发出 封阻BMP的受体将会阻止这些细胞的程序性死亡 dominant negative BMP receptor noggin expression 细胞凋亡与趾形成的关系 趾的形成依赖于趾间区和趾区生长速度的差异，决定细胞死亡的是间质细胞，不是外胚层细胞。 BMP2、BMP4、BMP7在趾间组织中表达，促进趾间组织的凋亡，趾间表达的noggin可拮抗BMP，从而防止部分趾间细胞的凋亡。 BMP蛋白可能参与了软骨的稳定和关节的形成过程。 Noggin蛋白作用：无Noggin则不表达GDF5，也不形成关节。 鸡肢形成晚期 正常小鼠前肢 Noggin缺陷型 凝软骨细胞