荧光探针技术测定细胞内离子浓度讲解.ppt

BTC:香豆素苯并噻唑Ga2+探针 * SBFI，对Na+选择性强：无K+时，SBFI与Na+结合的Kd为3.8nmol/L， 生理离子强度下，SBFI与Na+结合的Kd为11.3mmol/L PBFI，对K+选择性强：无Na+时，PBFI与K+结合的Kd为5.1nmol/L，生理离子强度下，PBFI与K+结合的Kd为44mmol/L * * * CFTR：Cl－转运通道囊性纤维化跨膜传导调节器 * 生理病理变化：细胞增殖，细胞凋亡，肌肉收缩，恶性肿瘤，多药抗性，离子转运和内环境稳定、入胞作用 * a)为Con组，b）为10μMol／ml的FITC－PAN，c）为100μMol／ml的FITC－PAN， * 生物性发光Ca2+探针 水母素、重组水母素及其衍生物 从发光的水母和其他海洋生物中分离得到的发光蛋白 优点： 可排除自发荧光的干扰 不渗出，不分泌 不发生区室化或细胞内隔离 检测长期间内Ca2+变化 Fluo-4荧光探针检测Ca2+ Bright-Field Fluo-4 fluorescence Merge Chenye Yang,et.al. Continuous Fluorescence Imaging of Intracellular Calcium by Use of Ion-Selective Nanospheres with Adjustable Spectra 荧光探针技术检测Na+、K+及其它离子 荧光探针技术检测Na+和K+ SBFI和PBFI及其AM酯：苯并呋喃基荧光团连接到一种冠醚 螯合剂 SBFI：对Na+选择性强 PBFI：对K+选择性强 SBFI和PBFI的应用： SBPI用于测定分离线粒体的Na+梯度或不同组织和细胞内Na+水平或Na+外流 PBFI用于测定K+外流与细胞凋亡间关系 荧光探针技术检测Na+ 钠绿 比SBFI对Na+的选择性更高 激发波长488nm，可替代Confocal和流式细胞仪进行检测 对细胞光损伤小 应用： 评估大鼠丘脑神经元持续Na+蓄积 检测缺氧诱导的神经元Na+内流 荧光探针技术检测Na+ CoroNa Red CoroNa Red氯化物 细胞通透性酯 对Na+高选择性 应用： 对细胞的Na+内流产生敏感反应 测定培养的上皮细胞和人肺组织气管气道表面液体 SBFI荧光探针技术检测Na+ Christophe M. Lamy,et.al. Sodium Sensing in Neurons with a Dendrimer-Based Nanoprobe Control TTX TTX阻断Na+通道，Na+荧光探针标记Na+，膜Na+电位紊乱 荧光探针技术检测其它离子 荧光Cl－探针：6-甲氧基喹啉衍生物SPQ 检测原理：经扩散限制的碰撞淬灭 应用： 用于检测CFTR活性 其他转运蛋白，如GABAA、红细胞Cl－／HCO3交换器等 荧光探针技术检测其他离子 氰化物 硫化物、亚硫酸根、硫酸根、硫代硫酸根 亚硝酸根、硝酸跟和一氧化氮 磷酸根和焦磷酸根 硒 荧光探针技术检测pH 荧光探针技术检测pH 细胞内胞质液pH常为6.8－7.4，而酸性细胞器内pH则为4.5－6.0 细胞内pH值可部分发生改变，而且速度相当慢 荧光pH探针可有效检测不同生理和病理过程中pH变化 生理范围的pH测定－SNARF、SNAFL 酸性细胞器的pH测定－LysoSensor探针 用于测定近中性pH的荧光探针 荧光素黄 —— 中性pH测定首选 发射波长较长、量子产率高 易从细胞内流失 荧光素黄衍生物 BCECF－ 2`,7`-二(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素 不易透过细胞膜 pKa=6.98,更适于生理条件下pH的测定 SNAFLs－半萘酚荧光素类 pKa在7.6－7.9范围内均发生漂移,可用比率法测定体系的p H 值 SNAFLs－半萘酚荧光素类 共轭程度更大, 其吸收波长也更长 酸性pH使用的探针 LysoSensor探针 与生物大分子共价结合，通过细胞固有机制主动摄取 检测酸性细胞器，追踪酸性细胞器运输 俄勒冈绿和二氯荧光黄衍生物 荧光探针技术检测pH 不同pH条件下，荧光探针CN-pH荧光强度不同， 测定荧光强度可计算出相应的pH值 Baoli Dong,et.al. Dual Site-Controlled and Lysosome-Targeted Intramolecular Charge Transfer?Photoinduced Electron Transfer?Fluores