MF078-M5eECLWesternBlotKit高灵敏度化学发光检测试剂盒.doc.doc

M5 eECL Western Blot Kit 高灵敏度化学发光检测试剂盒使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 eECL Western Blot Kit 50ml MF078-01 M5 eECL Western Blot Kit 250ml MF078-05 【储存条件】 2-8?C，避光保存。 【产品简介】 高灵敏度化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶（HRP）配套使用的的高灵敏增强型检测试剂盒。该产品基于新一代增强型化学发光底物研制而成，在HRP的催化下发生化学反应而发光，可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。其高灵敏度能够检测pg级别的抗原，发光信号强烈持久，可以使用X-光胶片曝光或者化学发光成像仪进行检测。 【产品组分】 MF078-01 MF078-05 eECL-A (Luminol Enhancer) 25ml 125ml eECL-B (Peroxide) 25ml 125ml 【注意事项】 1．在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免蛋白污染及高背景。 2．避光条件下，配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液，故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。 3．聚合美提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等，详情请查询公司网站。 【操作步骤】 1．二抗孵育完毕后，将印迹膜充分洗涤。 2．根据需要量，将eECL-A和eECL-B按照1：1的比例等体积混合，配制为化学发光检测底物工作液（一张8 cm×6 cm的膜大约使用1 ml工作液）。 3．弃去洗涤缓冲液，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育3-5分钟。 4．用移液器吸去多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。 5．在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。 【常见问题及解决方案】 问题 可能原因 解决方法 胶片反相（白色条带，黑色背景） 系统中HRP过量 稀释HRP标记物至少10倍以上 膜上出现棕色或者黄色条带 暗室中看到强烈发光 发光信号持续时间过短 信号较弱或者无信号 发光反应系统中HRP过多，消耗底物过快，引起信号迅速降低 稀释HRP标记物至少10倍以上 抗原/抗体量不够 增加抗原/抗体使用量 蛋白转移率低 优化转移系统 高背景 系统中HRP过量 稀释HRP标记物至少10倍以上 封闭不足 优化封闭程序 封闭试剂选择不当 选择另一种封闭试剂 冲洗不充分 增加冲洗时间，次数 曝光过度 减少曝光时间 抗原/抗体浓度过高 降低抗原/抗体使用浓度 蛋白条带为点状 蛋白转移失败 优化转移过程 膜未平衡 按照说明书处理膜 胶片与膜之间有气泡 曝光前去除所有气泡 出现非特异条带（高背景、信号维持时间较短） 系统中HRP过多 稀释HRP标记物 出现非特异条带（背景干净信号维持时间正常） 一抗用量过多 进一步稀释一抗 SDS导致非特异结合 在实验过程中避免使用SDS 【备注】 本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。 北京聚合美生物科技有限公司 Mei5 Biotechnology, Co., Ltd 北京市海淀区学院路甲5号768创意园B-1211 热线电话： （86）010