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正相液相色谱柱的使用与维护
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分离模式的选择
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正相吸附色谱
极性:固定相 流动相
固定相 - 极性
流动相(己烷, 庚烷)- 非极性
极性物质后出峰
正相色谱
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正相色谱柱的特点
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色谱柱的分类
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色谱柱的分类
按基质材料分类
硅胶基质柱
聚合物柱
ZrO2柱等
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色谱柱的分类
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正相液相色谱柱
正反相使用均可
绝不可沾水
正反相使用均可
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正相色谱柱的活化
活化注意要点:
1、保存溶剂:一般正相新柱出厂是用95%的正己烷:5%乙醇或纯异丙醇或正己烷保存;
例外:比如氰基柱既可以用作正相柱,也可以用作反相柱,一些厂家就用纯甲醇封柱。
2、异丙醇过渡:粘度大高柱压;小流速:0.2mL·min-1;先流路后过柱;约0.5h后换上流动相;若有缓冲盐,则应先用不含盐的同比例的流动相过柱,避免析出。
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氨基柱柱效检测
流动相:10%乙酸乙酯+90%正己烷
流速:1.0mL·min-1
标准溶液:乙苯(或甲苯)+苯甲酸甲酯
检测波长:254nm
参考(标准JB5226-91)液相色谱仪测试用标准色谱
柱
此方法同时适用氰基柱、硅胶柱
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氨基柱使用后冲洗
正相条件适用后:
首先50倍柱体积异丙醇(注意低流速)
其次50倍柱体积甲醇
最后异丙醇过渡到正相流动相条件
柱子长期不用的情况下,冲洗干净后用异丙醇或者正己烷保存。
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色谱柱再生
柱子使用一定时间后:柱效下降、老化,可以用以下方法清洗柱子恢复柱性能
方案1:依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子(各以0.5ml/min的流速,20倍柱体积),再换流动相
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