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选修3《现代生物科技专题》知识点总结
专题1 ? 基因工程
一、基因工程的基本工具
1.“分子手术刀”——
(1)来源:主要是从 生物中分离纯化出来的。
(2)功能:能够识别 DNA分子的某种 的核苷酸序列,并且使每一条链中
部位的两个核苷酸之间的 断开,因此具有 性。
(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式: 和 。
2.“分子缝合针”——
(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较:
①相同点:都缝合 键。
②区别:E·coliDNA连接酶来源于 ,只能将双链DNA片段互补的
之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合 ,但连接平末端的之间的效率较 。
(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将 加到已有的核苷酸片段的末端,
形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接 的末端,形成磷酸二酯键。
DNA连接酶DNA聚合酶DNA 链 链 模板 模板 模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成 化学本质 蛋白质 3.“分子运输车”——
(1)运载体具备的条件:① 。
② 。
③具有 ,供 。
(2)最常用的运载体是 ,它是一种裸露的、结构简单的、独立于
,并具有 的双链 。
二、基因工程的基本操作程序
第一步:目的基因的获取
1.目的基主要是指: ,也可以是一些具有 的因子。
2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有
法和 法。
3.PCR技术扩增目的基因
(1)PCR的含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。
(2)目的:获取大量的目的基因
(3)原理:
(4)过程:第一步:加热至90~95℃,DNA解链为 ;
第二步:冷却到55~60℃, 与两条单链DNA结合;
第三步:加热至70~75℃, 从引物起始进行 的合成。
第二步:基因表达载体的构建
1.目的:使目的基因在受体细胞中 ,并且可以 ,
使目的基因能够 。
2.组成: + + + +
(1)启动子:是一段有特殊结构的 ,位于基因的 ,是
识别和结合的部位,能驱动基因 ,最终获得所需的 。
(2)终止子:也是一段有特殊结构的 ,位于基因的 。
(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中 ,从而将
筛选出来。常用的标记基因是 。
第三步:将目的基因导入受体细胞_
1. :是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2.常用的转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是
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