1DNA的粗提取与鉴定规范.ppt

2.2005.江苏 　　将下列细胞或细胞器置于蒸馏水中，不会破裂的是 （ ） A.红细胞 　　　　 B.叶绿体 C.线粒体 　　　 D.洋葱表皮细胞 D * 新课导入 DNA的发现 两条反向平行多核苷酸链相互缠绕 右手双螺旋结构 磷酸与糖基通过磷酸二脂键相连，形成核酸的骨架 碱基平面与假象的中心轴垂直，糖环平面则与轴平行 碱基按A-T，G-C配对互补，彼此以氢键相联系 DNA结构 我们体内的DNA是什么样子的？ 如何提取体内DNA呢？ 专题5 DNA和蛋白质技术 教学目标 知识目标 1.掌握DNA的物理化学性质。 2.理解DNA粗提取的原理。 3.理解DNA鉴定的原理。 4.学会对植物或动物组织中的 DNA进行粗提取。 5.学会用二苯胺鉴定DNA。 过程与方法 情感态度与价值观 采取理论和实验相结合的方法，让学生掌握DNA的粗提取和鉴定的基本知识与方法。 1.培养学生认真严谨的科学态度。 2.锻炼学生实验动手能力。 3.培养学生团队合作意识。 教学重难点 课题重点 课题难点 DNA的粗提取与鉴定的方法。 DNA的粗提取与鉴定的方法。 内容解析 基础知识 DNA的物理化学性质 在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈蓝色 化学性质 耐受性： 80℃以上高温变性 被DNA酶分解，而不被蛋白酶分解 洗涤剂能破坏DNA结构 溶解度： 在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度最小 不溶于酒精 物理性质 如何利用DNA的物理化学性质提取和鉴定DNA？ 2.DNA在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度最小 思考： 将DNA置于0.14mol/NaCl溶液中，使DNA沉淀后与杂质分离 1.洗涤剂能溶解细胞膜，但不会破坏DNA 将DNA从细胞中取出来 3.DNA不溶于酒精，蛋白质溶于酒精 将DNA与蛋白质进一步分离 4.DNA与二苯胺在沸水浴条件下呈蓝色 作为鉴定DNA的依据 实验设计 实验材料 动物DNA材料 鸡血细胞 植物DNA材料 菜花细胞 化学材料 二苯胺试剂 NaCl溶液 酒精溶液 实验过程 1.破碎细胞，获取DNA滤液 讨论：破碎动植物细胞的方法一样吗？若不一样，分别应当如何破碎？ 破碎两种细胞的的方法不一样 无细胞壁，将其放入蒸馏水中，使其破裂释放DNA 动物细胞： 有细胞壁，需先用洗涤剂充分溶解细胞膜和细胞壁，充分搅拌和研磨，使细胞破裂释放DNA 植物细胞： 注意事项 在植物细胞研磨液中需加入SDS使蛋白质变性与DNA分离、EDTA抑制DNA酶活性。 在破裂动物细胞水溶液中需加入柠檬酸钠，防止细胞凝集； 2.除去滤液中的杂质 讨论： 滤液中可能有那些杂质？ 核蛋白 RNA 多糖 现在我们为大家设计了三种方案来去除杂质 方案一 原理：DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，析出杂质 调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA 再用2mol/LNaCl溶液溶解DNA 方案二 原理：嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质 在含DNA的滤液中加入嫩肉粉，反应10~15min 方案三 原理：蛋白质在60-75℃水浴中变性沉淀，DNA不变性 将含DNA滤液放在60-75℃的很温水浴箱中10-15min 3.DNA的析出 在DNA中加入预冷的体积分数为95％的乙醇，玻璃棒向一个方向均匀、缓慢的搅拌，溶液中析出丝状DNA. 为什么要加入预冷的乙醇呢？ 预冷的乙醇有以下优点： 1.抑制核酸水解酶的活性，防止DNA分解 2.降低分子运动，易于形成沉淀析出 3.增加DNA分子的柔韧性，减少断裂 4.DNA的鉴定 二苯胺法 1.取两只试管，一只加入5ml的２mol/L的NaCl溶液将DNA溶解，另一只作为对照组 2.在两只都加入4ml二苯胺，混合均匀后置于沸水中加热5min 3.观察结果 结果分析与评价 DNA的提取与鉴定 提取DNA的颜色为白色，与二苯胺反应呈蓝色。 成功 提取的DNA不为白色 与二苯胺反应不呈蓝色 DNA中含杂质较多 DNA含量较少 原因 原因 失败 相关链接 二苯胺鉴定DNA的化学原理 　　DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-λ酮基戊醛，它再和二