4789.5志贺菌检验规范.ppt

XLD 4 痢疾典型菌落 志显 5 熟肉制品中宋内的分离效果 RF志显 XLD 志显 6 蔬菜制品中宋内分离效果 XLD 志显 7 鲍氏在生肉中的分离效果 XLD 8 熟肉制品中福氏的分离效果 志 显 初 步 生 化 选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种TSI、葡萄糖半固体、营养琼脂斜面，36 ℃?1 ℃培养20 h～24 h， 观察结果。 培养物中出现以下情况可以弃去 a.在三糖铁琼脂斜面上蔓延生长 b.发酵乳糖或蔗糖 c.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的 d.产气的 e.产生硫化氢 f.有动力的培养物 初步生化:三糖铁（TSI） 现象 说 明 底层 黄色 葡萄糖阳性 红色或不变色 葡萄糖阴性 黑色 产H2S 气泡 产气 斜面 黄色 乳糖和（或）蔗糖阳性 红色或不变色 乳糖和（或）蔗糖阴性 志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。 如图中2号管的反应. 双管糖 H2S阳性就是 纸条变黑 反之不色?? H2S纸条为白色 吲哚阳性就是 纸条变红 反之不变色? ?吲哚纸条为黄色 湿软感 生化试验 生化反应 A群：痢疾志贺氏菌 B群：福氏志贺氏菌 C群：鲍氏志贺氏菌 D群：宋内氏志贺氏菌 ?-半乳糖苷酶 －c － －c ＋ 尿素 － － － － 赖氨酸脱羧酶 － － － － 鸟氨酸脱羧酶 － － －a ＋ 水杨苷 － － － － 七叶苷 － － － － 靛基质 －/＋ (＋) －/＋ － 甘露醇 － ＋b ＋ ＋ 棉子糖 － ＋ － ＋ 甘油 (＋) － (＋) d 注：+阳性；-阴性；-/+多数阴性；+/-多数阳性；（+）迟缓阳性；d有不同生化型。 a 鲍氏13型为鸟氨酸阳性。 b福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。 c痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。 志贺氏菌属四个群的生化特征 附加生化实验 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenic E.coli）、A-D（Alkalescens-D isparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验(36 ℃培养24 h～48 h)。志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3 西蒙氏柠檬酸盐实验 葡萄糖铵实验 粘液酸盐实验 挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。 鉴别细菌能否利用铵盐作为唯一氮源并分解葡萄糖产酸，溴麝香草酚兰是指示剂，产酸时培养基由绿色变为黄色。 细菌如能利用粘液酸盐，则可分解而产酸，使培养基中的溴麝香草酚兰呈黄色。 阴性(1,2) 阳性(3) 1 2 3 阳性 阴性 阴性 阳性 生化鉴定 增加了API 20E诊断试剂条和全自动细菌生化鉴定仪VITEK； 血清学鉴定 1.抗原的准备 志贺氏菌属没有动力，所以没有鞭毛抗原。 抗原构造与分型：志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（O）及表面抗原（K）组成。 O抗原为糖脂蛋白复合物，可分为型特异性抗原和群特异性抗原。志贺氏菌分为4个群，48个血清型（包括亚型及变种）。K抗原在志贺菌属分类上无意义。 菌体（0）抗原 1.型特异性抗原：化学组成为多糖，是光滑型菌株所含有的重要抗原。当菌株变为粗糙型时，此抗原也常随之消失，根据所含的型抗原不同，可将志贺菌属分为A、B、C、D四个群及39个抗原型。 2.群特异性抗原：为光滑型菌株的次要抗原，也是菌体抗原的一种。特异性较低，主要存在于B群。根据所含的群抗原不同，可将一些菌型分为多种亚型。 表面抗原（K抗原） 在新分离的某些菌株菌体表面含有此种抗原。不耐热，加热100℃1小时即被破坏。具有此种抗原的菌株，可阻止菌体抗原与相应免疫血清发生凝集。 2.凝集反应 菌痢的流行型别变迁史1950- 20世纪40年代以前,A群是主要的流行菌，60年代消声灭迹，1969-1970年在中美地区暴发，1972-1978年又在南亚地区流行。国内从90年代后期鲜有报道，偶有暴发。 B群一直是国内的优势群。有资料表明，北京地区从1950-1989年，F1a和F2a一直是主要的交替流行菌株（其中1986年以5型、y变种、1988-1989年以F2a、3a为主）。 上海宝山区1990-2000年一直以F2a为主，2001年以宋内为主，2002-2003年又以F2b为主，2004年至今一直是F4c为流行菌型。 2005年上海市菌痢型别分析 来源 菌株数 福氏志贺菌型分布