2.2.动物细胞培养和核移植答辩.pptVIP

P47最上面 1、大规模的生产生物制品。 2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。 3、检测判断物质的毒性。 4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于 等，为 及其他疾病提供理论依据。 阅读课本P50页 * 专题2.2动物细胞工程 2.2 动物细胞工程 生产单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 是其他动物细胞工程技术的基础。 一.动物细胞培养 如何进行细胞培养? 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 (一)概念 (二) 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 剪碎 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 洗涤、稀释、分离 原代培养 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞增殖缓慢，核型可能变化 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 贴壁生长 接触抑制 10代以内，保持正常二倍体核型 传代培养 有关概念 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 遗传物质 改变 原代细胞 培养 加 液 40—50代细胞(细胞株) 未 遗传物质 改变 无限传代（细胞系） 已 传代培养 胰蛋白 酶 有关概念 　　细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40--50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 1、无菌、无毒 消毒、灭菌 抗生素 定期更换培养液（清除代谢废物） 2、营养 合成培养基：糖、氨基酸、生长因子、无机盐、微量元素（血清、血浆） 3、温度和pH 36.5±0.5℃，7.2---7.4 4、气体 95%空气，5%CO2 .植物组织培养的条件；应用 动物细胞培养的条件 植物组织培养和动物细胞培养的比较 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 获得细胞或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株 培养目的 葡萄糖 动物血清 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 (四) 动物细胞培养技术的应用 筛选抗癌药物 治疗和预防癌症 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物） 分 类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 (一)、 动物细胞核移植概念： (二)、体细胞核移植的过程： 请看教材P48图2-21 思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细胞作为受体细胞有什么好处？ 2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？ MⅡ中期卵母细胞 诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成 细胞分裂和发育进程。 卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体现全能性的物质。 (二)、体细胞核移植的过程： 代孕母体 P49讨论： 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部 来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在 供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将 受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏(P49小资料）。 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左 右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞 遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞 一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细 胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基 础，通常采用传代10代