色谱法概述讲义.ppt

柱色谱法：将固定相装在一金属或玻璃柱中或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从柱头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法。 纸色谱法：利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。以吸附水分的滤纸作固定相 薄层色谱法：将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。以涂敷在玻璃板上的吸附剂作固定相 根据吸附柱色谱法的分离过程和原理可以推断其他各种类型的色谱方法的分离过程和原理。 色谱流出曲线和色谱峰 基线 峰高 保留值 区域宽度 分配系数 分配比 分离度 试样中各组分经色谱柱分离后，按先后次序经过检测器时，检测器就将流动相中各组分浓度的变化转变为相应的电信号，由记录仪所记录下的信号——时间曲线或信号——流动相体积曲线，称为色谱流出曲线，或色谱图。 流出曲线：色谱仪记录器记录的电信号强度对t作图所绘制的曲线。 色谱峰： 曲线上突出的部分。 基线：色谱柱中仅有流动相通过时，检测器响应的信号记录，通常与横轴平行。基线反应检测器的噪音随时间的变化，稳定的基线应当是一条直线。 峰高（h）：色谱峰顶点与基线之间的垂直距离。 峰面积（A）：色谱峰所包围的面积。 色谱峰区域宽度：描述色谱流出曲线的另一个重要参数，用来量度色谱分离的效率，反映柱效的高低。 区域宽度的三表示形式 标准偏差σ：0.607倍峰高处色谱峰宽的一半 半峰宽W1/2：峰高一半处对应的峰宽 峰底宽度W：峰两侧拐点上切线在基线上的截距 保留值 保留时间tR：组分通过色谱柱所需的时间 死时间t0：不被保留的组分从进样到色谱峰最大值出现的时间 调整保留时间tRˊ：扣除死时间后的保留时间tRˊ＝tR－t0 死体积VM：指惰性组分从进样开始到柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积；指从进样器到柱后出口未被固定相所占据的一切空间。可由死时间与流动相流速Fc(mL/min)计算：VM = tM·Fc 保留体积：从进样至被测组分出现最大浓度时流动相通过的体积，VR。 调整保留体积VR’：某组分的保留体积扣除死体积，称为该组分的调整保留体积。 相对保留值γi.s：某组分的调整保留值与另一基准物的调整保留值之比。 注意：相对保留值不是两个组分保留时间或保留体积之比；而是调整保留时间或调整保留体积之比。 分配系数（ partion factor） K 分配系数 K 的讨论 分配比 （partion radio）k 分离度: 相邻两色谱峰保留值之差与两组分色谱峰底宽度平均值之比，用R表示。 根据色谱峰的个数判断样品所含组分的最少个数； 色谱峰两峰间的距离，是评价固定相和流动相选择是否合适的依据； 色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据； 根据色谱峰的保留值（或位置）进行定性分析。 根据色谱峰下的面积或峰高进行定量分析。 七、反相色谱法RPCreversed-phase chromatography 反相色谱法:包含了任何一种使用非极性固定相的色谱学方法。 “反相”这个词有其历史背景。70年代，大多数液相色谱是在未修饰的氧化硅或氧化铝上完成的，他们表面的化学性质是亲水性的，对极性化合物具有更强的亲和力，因此叫做“正相” 色谱。 若采用烷基链共价键合到支持表面上，则会倒换洗脱顺序。反相色谱法中，极性化合物先被洗脱出来，而非极性化合物被保持住，因为它们亲和于反相表面。 高效液相色谱法包括正相高效液相色谱法和反相高效液相色谱法。 正相高效液相色谱法：流动相的极性＜固定相的极性，也就是以极性键合相为固定相（常以氨基、氰基键合相等作为固定相）。 反相高效液相色谱法：流动相的极性＞固定相的极性，也就是以非极性键合相为固定相（常以十八硅烷C18、辛烷C8、甲基C1、苯基等作为固定相）。 在其他色谱方法中所使用的所有数学与试验研究在反相色谱中亦适用（例如色谱分辨率与柱长成正比）。如今，反相柱色谱法在分析型液相色谱中占绝大多数比例。 同一根柱子，可能是正相，也可能是反相，例如安捷伦 ZORBAX CN柱，用正己烷-异丙醇作流动相就是正相HPLC，用水-甲醇/乙腈就是反相HPLC。 八、高效液相色谱法 液相色谱仪的原理 由于样品溶液中的各组分的性质不同，导致它们在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从色谱柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。 下列三个化合物用硅胶吸附色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（95：5）洗脱，判断三者流出色谱柱的先后顺序。 例题 A B C CH3