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学号 编号 研究类型 基础研究 分类号 Q51 综合论文（设计） Bachelor’s Thesis 论文题目 重组人亲环素A的表达及纯化 作者姓名 朱祎 指导教师 张新潮 所在院系 生物系 专业名称 生物技术 完成时间 2015年3月15日 目录 1引言 7 1.1 亲环素A的概述 7 1.1.1亲环素A的结构 7 1.1.2 亲环素A的生物学功能 8 1.1.3 研究背景和目的 9 1.2 本论文的研究工作 10 2 引言 11 2.1蛋白质纯化法 11 2.2 材料与方法 12 2.2.1试剂和设备 12 2.2.2实验步骤与方法 14 2.2.3表达产物的纯化 15 2.3结果与分析 16 2.4 讨论 18 3.参考文献 18 附表1 硫酸铵0℃时饱和度表 21 重组人亲环素A的表达和纯化 摘　要: 亲环素ACyclophilin A，CyP A）是免疫抑制剂环胞菌素A（CsA）的胞内受体，是胞质内一种具有肽基脯氨酰顺/反异构酶活性的蛋白质。重组有CyPA基因的大肠杆菌M15在含有氨苄青霉素(100μg/ml)和卡纳霉素(25μg/ml)的LB培养基中培养，当A600 达到大约0.5时，终浓度为1M的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导培养6h。菌体提液经50%(NH4)2SO4沉淀和DEAE-Sepharose CL-6B柱层析得到纯化的重组CyP A。糜蛋白酶偶联法测定显示重组CyP A具有肽基脯氨酰顺/反异构酶活性。关键词：亲环素A；基因表达；纯化肽基脯氨顺/反异构酶Abstract:?Cyclophilin?A?(Cyclophilin?A,?CyP?A)?is an?immunosuppressant?cyclosporin A(CsA)?intracellular?receptors,?cytoplasmic?having a?peptidyl prolyl cis?/?trans isomerase?activityof protein.?The ReAT PCR amplification?CYPA?gene fragment?inserted intoprokaryotic expression vector p?ET11C,?recombinant plasmid was obtained by?PET1l / CyPA,,?transfer of?Escherichia coli?to obtain high expression.?SDS-PA?GE analysis showed thatthe expression of the recombinant CyP,?A?accounted for more than?40% of?soluble protein.After 50%?ferric sulfate?precipitation?and D?E?A?E?se?hP?AOR?se?C?-L 6?B column chromatography?purified?recombinant CyPA.?Determination of?recombinant CyPA?team with askin?based?proline?cis / trans?isomerase?activity by?chymotrypsin?coupled method..Recombinant?CyPA gene?of Escherichia coli M15?in?containing ampicillin?(100 g/ml)?andkanamycin?(25 g/ml)?cultured in LB,?when the A600 reaches?about 0.5,?the final concentration of?1M?isopropyl?dithiophosphate?beta?galactosidase?(-D-?IPTG)?induced by?cultured 6h.Baterail?crude extract by?50%?(NH4)?2SO4 precipitation?and DEAE-Sepharose?CL-6B column chromatography?to obtain?purified recombinant CyP?A.?Determination of?recombinant CyP?Awith?peptidyl prolyl cis?/?trans isomerase?activity of?chymotrypsin?coupled method.?SDSelectrophoresis s