发酵工业与发酵工程_07染菌的防治讲述.ppt

青霉素：产青霉素酶的杂菌 疫苗：全部废弃 柠檬酸：主要防止前期染菌 谷氨酸：噬菌体危害大 肌苷、肌苷酸：易染菌 二、不同种类的杂菌对发酵的影响 青霉素发酵：污染细短产气杆菌比粗大杆菌的危害大 链霉素发酵：污染细短杆菌、假单孢杆菌和产气杆菌比粗大杆菌的危害大 四环素发酵：污染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌的危害较大 柠檬酸发酵：最怕污染青霉菌 肌苷、肌苷酸发酵：污染芽孢杆菌的危害最大 谷氨酸发酵：最怕污染噬菌体 高温淀粉酶发酵：污染芽孢杆菌和噬菌体的危害较大 三、不同染菌时间对发酵的影响 种子培养期染菌：已造成多个发酵罐染菌； 发酵前期染菌：杂菌与生产菌争夺营养成分，干扰生产菌的繁殖和产物的形成 发酵中期染菌：严重干扰生产菌的繁殖和产物的生成 发酵后期染菌：如杂菌量不大，可继续发酵。如污染严重，可采取措施提前放罐 染菌程度越大，即进入发酵罐的杂菌数目越多，对发酵的危害越大。 染少量杂菌，有时可以容忍； 前期和中期染菌，应结合染菌程度综合考虑。 有机溶剂萃取工艺：染菌的发酵液含有更多的水溶性蛋白质，易发生乳化，使水相和溶剂相难以分开。 离子交换工艺：杂菌易粘附在离子交换树脂表面或被离子交换树脂吸附，大大降低离子交换树脂的交换量。 对内在质量的影响：染菌的发酵液含有较多的蛋白质和其它杂质。对产品的纯度有较大影响。 对产品外观的影响：一些染菌的发酵液经处理过滤后得到澄清的发酵液，放置后会出现混浊，影响产品的外观。 第二节 染菌的检查、分析和防治 一、发酵染菌后的异常现象 1、种子培养染菌后的异常现象 （1）菌体浓度异常 （2）理化指标异常 （3）代谢不正常 （1）菌体浓度过高或过低 罐温长时间偏高；溶氧不足；营养条件差；种子质量差；菌体自溶。 （2）pH不正常：培养基质量、灭菌效果、补糖等影响；是所有代谢反应的综合反映。 （3）溶解氧异常 染菌：染好氧菌，染厌氧菌 （4）泡沫过多 泡沫的消长不符合规律；培养基灭菌时温度过高或时间过长，葡萄糖变成氨基糖会引起泡沫。 （5）代谢异常 1、染菌的检查 （1）显微镜检查法（最简单、最直接、最经常） （2）肉汤培养基检查法（酚红变色pH6.8-8） （3）平板划线培养或斜面培养检查法； 平板制好后，应先保温24小时，确定无菌 （4）双层平板培养法 （一）发酵的染菌率 （1）染菌原因分析就是总结染菌的教训，防范于未然。 （2）主要染菌原因：种子带菌，无菌空气带菌，设备渗漏，灭菌不彻底，操作管理不当。 杂菌是耐热的芽孢杆菌（灭菌、死角） 杂菌是不耐热菌（种子带菌、空气带菌，设备渗漏，管理操作等） 杂菌是真菌(设备渗漏，无菌操作不彻底等） 大批量发酵罐染菌：种子、空气； 前期：种子带菌，灭菌问题； 中后期：空气带菌； 部分发酵罐染菌： 前期：种子带菌，灭菌问题； 中后期：补料系统和加泡系统； 个别发酵罐连续染菌：设备渗漏 种子培养阶段：种子，灭菌，操作； 发酵前期：种子，灭菌，操作； 发酵后期：空气，补料，设备渗漏，泡沫 1、种子带菌及防止 （1）菌种在培养或保存过程中受污染（试管塞，查看的时候要注意） （2）培养基及用具灭菌要彻底，应防止假压； （3）菌种在转接过程中受污染：操作不当，管理不严；（缓冲间） （1）原料性状：淀粉质原料，升温过快或混合不均匀，易结块，团块中包埋的活菌不易杀灭；可升温前搅拌和加淀粉酶。 （2）实罐灭菌时未充分排除罐内空气：造成假压，升温时，应打开排气等阀门放气。 （3）连续灭菌时，蒸汽压力波动大，培养基未达到灭菌温度，导致灭菌不彻底。 （1）发酵设备、管道、阀门长期使用，由于腐蚀、摩擦和振动等原因，造成渗漏。 （2）微小渗漏的检查：加入碱性水，用浸湿酚酞 指示剂的白布擦，有渗漏则白布显红色。 （1）灭菌过程中严防泡沫升顶，尽可能添加消泡剂防止泡沫大量产生； （2）传感器探头用化学试剂浸泡法灭菌可能导致灭菌不彻底。 （1）噬菌体污染的预防 ① 净化生产环境，消灭污染源 ②做好环境卫生，消灭噬菌体与杂菌 ③ 严防噬菌体与杂菌进入种子罐或发酵罐内 ④改进设备装置，消灭死角 ⑤防止操作失误 ①并罐法 ②转换使用菌种或使用抗性菌株 ③放罐重消法 ④罐内灭噬菌体的方法 ⑤添加噬菌体抑制剂的方法 种子培养期染菌的处理 灭菌、重新制种、倒种 发酵前期染菌的处理 发酵中后期染菌的处理 废液应加热至120℃，保持30min才能放罐 染菌后对设备的处理 重新使用前，应彻底清洗，空罐灭菌 思考题： 1. 不同染菌时期对发酵有何影响。 2. 试从染菌分析染