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研究生实验—RuBPCase活性测定的技术
RuBPCase活性测定技术 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶 (E.C. 4.1.1.39) 14C放射性同位素示踪法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 目 录 Rubisco的发现和催化反应 Rubisco 的亚基组成 Rubisco的体内外活化 Rubisco的活性测定方法 放射性同位素的使用和注意事项 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 1. Rubisco的发现和催化反应 1950s Wildman SG Fraction I protein 1954 Calvin RuBPCase purified 1968 Kawashima Fraction I protein crystallization Fraction I protein = RuBPCase 1970s RuBPOase found 《Nature》、《Science》上文章认为它是光合作用的限速酶,甚至是产量的限速酶! Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. RuBPCase催化反应 以上两个反应为竞争性反应 Ω:特征因子 受酶一级序列和构象影响 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. (8ruc active site) Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Ω 特征因子 特征因子越大,利用低CO2的能力越强;对于C3植物有重要意义; 生物越低等,特征因子越小; 一般高等植物的特征因子50-100,目前自然界发现最高的为海洋红藻的Rubisco,特征因子为210左右; Vmax同Ω很难兼得。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 低效率的酶 Turnover number 转换数 CAT: 10000 RuBPCase: 3-4 Site-directed mutation Spreizter等试图分子改造 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 2. Rubisco的亚基组成 Form I: L8S8 高等植物 Form II: (L2)n 光合细菌 Form III: 古核生物 LSU叶绿体编码;SSU细胞核编码; 自然界最丰富的蛋白质 Rubisco在叶绿体中含量达到300mg/ml Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3. Rubisco的体内外活化 active form inactive form in vitro activation 用于活化的CO2不同于参与反应的CO2 Mg2+:20mM ACO2: 10mM (NaHCO3) 植物体内无法实现! Evaluation only. Created with Aspose.Slides for
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