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灭菌时间计算 【例1?有一发酵罐内装40m3培养基，在121℃进行实罐灭菌。原污染程度为每1mL有2×105个耐热细菌芽孢，121℃时灭菌速率常数为1.8min1。求灭菌失败机率为0.001时所需的灭菌时间。 解 N0＝40×106×2×105＝8×1012 （个 Nt＝0.001（个 K＝1.8min－1 灭菌时间t＝lg＝lg＝20.34（min） 但实际上培养基在升温阶段就有部分菌被杀灭，特别是当培养基加热至100以上，这个作用较为显著。因此保温灭菌时间实际比上述计算的要短，虽然在降温阶段也有杀菌作用，但降温时间较短，在计算时一般不考虑。在升温阶段，培养基温度不断升高，菌死亡速率常数也不断增大，速率常数与温度的关系为式3-3）或3-4）。当以某耐热杆菌的芽孢为灭菌对象时，此时A1.34×1036s－1，E2.84×104J/mol，因此式3-4）可写为： lgK＝＋36.12 （3-8） 利用式3-8）可求得不同温度下的灭菌速率常数。若欲求升温阶段如温度从T1升至T2的平均菌死亡速率常数，可用下式求得： Km＝ （3-9） 式3-9）中的积分值可利用图解法求得，见例3-2。 若培养基加热时间一般以从100至保温的升温时间tp已知，Km求得，则升温阶段结束时，培养基中残留菌数Np可从下式求得： Np＝ （3-10） 再由下式求得保温阶段所需时间： lg （3-11） ?????【例2例3-1中，灭菌过程的升温阶段，培养基由100升至121共需15min。求升温结束时，培养基中芽孢数和保温所需时间。 TK 373 376 379 382 385 388 391 394 K/s-1 2.35×10-4 4.5710-4 1.03×10-3 2.09×10-3 4.08×10-3 8.14×10-3 1.62×10-2 2.87×10-2 【解 T1＝373K，T2＝394K，根据式3-8）求373K394K之间若干K值，K-T关系如下表：以K对T作图得图3-4，在K-T曲线图中，若以横坐标2K及纵坐标0.002s1组成一小方格，则每个小方格的值为2×0.0020.004Ks－1。现用计数法求得K-T曲线以下以373394K之间的范围内小方格共32个，则总面积之值为32×0.0040.128K·s－1 。由此可知：m＝＝＝0.0061 (s－1) 根据式3-10）升温结束时培养基中残留的芽孢数为： Np＝＝＝＝3.31010 （个根据式3-11）求得保温所需时间为： lg＝lg＝17.3 （min） ? （2）连续灭菌 连续灭菌的灭菌时间仍可用3-2）求得，但培养基中的含菌数应该改为每1mL培养基的含菌数，则式3-2）应改为： lg （3-12） 式中C0及Ct分别为单位体积培养基灭菌前、后的菌数，个/mL。例3-3 若将例3-1中的培养基采用连续灭菌，灭菌温度为131℃，此温度下灭菌速率常数为15min1，求灭菌所需的维持时间。解 C0＝2×105 （个/mL Ct＝＝2.5×10－11 （个/mL t＝lg＝2.37 （min）