基因组DNA的提取及实验方法指导.docVIP

一： 基因组DNA的提取 采用SDS法，具体步骤如下： 称取2-4克（）叶片，放入研钵中，加液氮后充分研磨。 转入20ml (约样品的一倍体积) DNA提取液中，混匀，65℃水浴振荡（301-501 rpm）1h左右。 取出冷却至室温，加入等体积氯仿/异戊醇（24:1）混合液，充分混匀 后，置摇床上轻摇一小时。 室温振荡1h左右使之完全混合。 室温3000rpm离心30min。 取上清液加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20℃静置1h后，使DNA沉淀。 钩出DNA，于70%酒精中漂洗2-3次。 挑出DNA，用DNA 真空干燥机真空干燥后，溶于适量TE（pH=8.0）中。 DNA纯化：加入适量 10mg/ml RNase，置37 oC 30min，充分降解RNA。再用氯仿-异戊醇抽提一次，DNA沉淀、干燥、溶解程序同上。取适量DNA稀释液与标准浓度λDNA同时在1%琼脂糖凝胶电泳上进行DNA定量并检查DNA质量。附：（1）DNA提取液（1000ml） 1M Tris-HCl（PH8.0） 100ml 0.5M EDTANa2（PH8.0） 100ml 5M NaCl 100ml 20% SDS 62ml Na Bisufite (Coda S-9000) sigma) 3.8g ddH2O 637.5 m