中山大学考研《生物化学》蛋白质化学补考试题.pdfVIP

7.02 2001年秋季 Ver1.02版 蛋白质生物化学……补考答案 问答 1（15 分） a）(10 分)画出下面五肽在 PH=7.0 时的结构示意图： N-Met-Tyr-His-Glu-Ala-C 肽键占 2.5 分 每个侧链占 1.5 分 b)(2 分)由“氢键供体”与“氢键受体”间形成的氢键可稳定α-螺旋结构。假设在 a)部分你所画的肽 链结构是组成α-螺旋的一部分，那么甲硫氨酸将与哪个氨基酸形成氢键？ 甘氨酸 （n+4） c）（2 分）从 a)部分你所画出的图中，圈出由甲硫氨酸和在 b)部分你所指出氨基酸间形成的氢键中的相 关原子。 图上已标明 d)（1 分）哪一种氨基酸在α-螺旋结构中很少见？脯氨酸 问答2（15分） 你们的大学助教在进行蛋白质化学实验的一周里表现得不好。阐述下面的错误将如何影响β-半乳 糖酶的纯化及活性分析。（完整的回答将包括你认为“正确”的反应物所起的作用—或者它为什么很重 要—改变它将会对试验结果产生怎样的影响） a) Anita 将APTG-琼脂糖用完了, 所以她决定使用Xgal-琼脂糖来制备亲和柱。 Anita 想在她的亲和柱中使用 APTG-琼脂糖作为介质，因为 APTG 是一种不水解的乳糖底物类似 物。因此 β-gal 将与APTG 相结合，直至洗脱才分离。 Xgal 可被β-gal分解, 所以包含Xgal的柱子 不能留住β-gal。相反，β-gal 将从柱子上流走 (同时流出液将是蓝色的！). b)在Western杂交中， Jean 忘记在添加一抗与二抗之间对硝化纤维素膜进行漂洗。 在一抗添加之后紧接着要对膜进行漂洗，这样做是为把与膜非特异性结合的抗体洗去。（也就是把 未与β-gal结合的抗体洗去）如果未经漂洗，Jean 就把二抗加入，那么在膜上很多地方就可能出现紫 色的条带或污点，而不仅仅在β-gal结合的位置上出现。 这样就很难分辨出哪个条带是含β-gal的条 带。 7.02 Fall 2001 Protein Biochemistry Makeup Key 7.02 2001年秋季 Ver1.02版 c) 在β-半乳糖酶活性测定中，Matt 用乳糖代替了ONPG 。 ONPG是 β-gal的一种底物，它被分解后产生 ONP 和半乳糖。 产物ONP由于带有黄色可在A420下进 行测量。通过这种方法我们可以测定β-gal的活性。 而Jed却不能测定β-gal的活性，因为乳糖代谢的两种产物（葡萄糖与半乳糖）中的任何一种都是不易 测定的。 问答3（30分） a) (10 分) 在下面IgG分子的图上标明以下： A. 重链（heavy chain） B. 轻链 (light chain) C. CH1, CH2, CH3 (重链上不变的结构域) D. VH and VL (可变结构域) E.抗原结合位点 (CDRs) 经过学习 7.02 部分的实验内容,你将在蛋白质生化实验室中做UROP。 你的实验中探讨的是AB复合 物，它是由(“A”+“B”)两种蛋白构成的。你的设想是发现在A或B中的突变是怎样影响复合物形成的。 你首先要纯化野生型复合物。经过大量的纯化步骤后，你得到的最纯的样品最终仅剩两条带（通过 SDSPAGE后经考马斯亮蓝检测）。 为鉴定这两条带，你决定进行蛋白质印迹。你使用一抗（兔抗-“A”）进行探测，接着使用碱性磷 酸酶标记的二抗（羊抗兔IgG）。NBT-BCIP进行反应后你将从最纯样品得到的两条带中明确分辨出其中 一条是A蛋白。 接下来，你将鉴别另一条带是否是B蛋白。你的博士后告诉你可以通过处理膜来剥除A蛋白的特异性 抗体（同时，很显然二抗也结合在上面），然后你就可以用B蛋白的特异性抗体重新进行探测。 b) (9 分) 你向你的导师借来“Western杂交剥除”的方案，注意它要求使用含有β-巯基乙醇和去垢剂 （Tween 20）的溶液处理膜，将其在50℃加热。用你所学的关于抗体结构的知识，解释这种处理方法是 怎样使抗体从膜上“剥除”掉的。 在IgG中,两条重链间以及重链与轻链间都是通过二硫键的作用相互联结。β-巯基乙醇（还原剂） 将还原二硫键，导致这四条IgG链间分离。去垢剂与加热处理使蛋白质进一步变性。由于 CDR (识别抗