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2013级研究生《医学分子生物学》网络作业1 名词解释 基因组：在生物学中，一个生物体的基因组是指包含在该生物的DNA（部分病毒是RNA）中的全部遗传信息，又称基因体(genome)人类基因组计划(humangenomeproject,HGP)是由美国科学家于1985年率先提出，旨在阐明人类基因组30亿个碱基对的序列，发现所有人类基因并搞清其在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息，使人类第一次在分子水平上全面地认识自我。这一计划旨在为30多亿个碱基对构成的人类基因组精确测序，发现所有人类基因并搞清其在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息。与曼哈顿原子弹计划和阿波罗计划并称为三大科学计划。 基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。 指经过适当处理后容易接受外来DNA进入的细胞。如大肠杆菌经CaCl2处理，成为容易受质粒DNA转化的细胞 spe1和bln1是同尾酶，而你连接的时候，目的基因连接进去的话有两种情况，一种是再次形成spe1和bln1这两个酶切位点在物理和化学因素的作用下，维系核酸二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA由双链解旋为单链的过程。 热变性中光吸收达到最大吸收（完全变性）一半（双螺旋结构失去一半）时的温度。对DNA加热时，二条链的氢键断开变成单链状态，把引起这种变化的温度称为融解温度（Tm）。通常在中性的稀盐溶液中对DNA加热，测定紫外吸收，紫外吸收增高的中点也称为融解温度。融解温度依DNA种类而定，核苷酸链越长，GC含量越高则越增高。 一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。E.coli为例，约为2.4×109道尔顿，长度为42000 Kb左右（1300?m），形态为闭合环状，约编码2000个基因，原核生物的DNA位于细胞的中央，称为类核（nucleoid）。E.coli的类核由支架 (scafford）和向四周伸出的100个DNA环组成，支架的形状因染色体而异，长度为3-5?m，支架是含RNA和蛋白质的复合结构，四周的每个环就是一个独立的功能区， 长40Kb，13?m。E.coli在体内（in vivo）其基因组内含负超螺旋，每200bp就有一个负超螺旋（?=0.05）,即基因组中含5%的负超螺旋。每个功能区的末端保持超螺旋状态，而且一个区的超螺旋不影响另一个区的超螺旋，功能区的相对独立性使得同在一个环状染色体上的基因可以独立表达和调控。基因组内的超螺旋以两种状态存在：（1）自由状态的超螺旋不受束缚，可在环内传递张力（2）蛋白结合在DNA上超螺旋受到束缚，不能传递张力。 ２细菌的染色体约有75%的DNA编码基因，余下25%的DNA为基因间的DNA（intergenic DNA）。有一部分基因间的DNA是有重要功能的，如复制原点(origin of replication)，另一些基因间区域可能涉及到和DNA包装蛋白的相互作用 简述双向凝胶电泳的原理。 答：双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二向则按分子量的不同用SDS分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。近年来经过多方面改进已成为研究蛋白质组的最有使用价值的核心方法。原先的载体上面有两个抗性基因抗A和抗B，当我们的目的基因片段插入到载体中以后就破坏了其中一个抗性基因A的表达，所以在筛选的时候先用B筛出含有目的基因的载体和空载体，再用A筛出含有目的基因的载体，因为空载体在含有A的情况下还能生长，而含有目的基因的就不能生长具有松驰型复制子（如ColE1），复制子（replicon）是质粒自我增殖所必不可少的基本条件，并 可协助维持使每个细胞含有一定数量的质粒拷贝。在复制子外存在几个单一的酶切位点（或多克隆位点），以便目的DNA片段插入。具有插入失活的筛选标 记，理想的质粒载体应具有两种抗菌素抗性标志，如氨苄青霉素抗性基因（Ampr）和四环素抗性基因（Tetr） 等，以便从平板中直接筛选阳性重组子。分子量相对较小和较高的拷贝数。此外，质粒的缺点是容量较小，一般只能接受小于15kb的外来DNA，插入片段过 大会导致重组子扩增速度减慢，甚至使插入片段失活。DNA的缺口平移法。缺口平移是一种快速、简便、成本相对较低以及生