寄生虫实验诊断方法.doc

寄生虫感染的诊断 1临床诊断：A病史、症状、体征 B物理诊断：X线、B超、CT、MRI 2实验室检查：A病原学方法：粪便检查；血液检查；排泄物分泌物检查；其他器官组织检查 B免疫学方法 C分子生物学方法 （一）粪便检查：直接涂片法；厚涂片法；浓集法；毛蚴孵化法；肛门拭子检查法；钩蚴培养法；虫卵计数法；定量透明法；带绦虫孕节检查法。粪便检查是诊断寄生虫病常用的方法。要取得准确的结果 1）粪便必须新鲜，送检时间一般不宜超过24小时； 2）盛粪便的容器要干净，并防止污染与干燥； 3）粪便不可混杂尿液等，以免影响检查结果； 4）取材部位：尽可能取病变部位。 直接涂片法:用以检查蠕虫卵、原虫的包囊和滋养体。方法简便，适用范围广，但检出率相对较低。一般要求连续作3次涂片，可提高检出率。 ⑴ 蠕虫卵检查：方法：一般在低倍镜下检查，如用高倍镜观察，需加盖片。应注意虫卵与粪便中异物的鉴别。虫卵都具有一定形状和大小；卵壳表面光滑整齐，具固有色泽；卵内含卵细胞或幼虫。 ⑵ 原虫检查：1）活滋养体检查：方法同查蠕虫卵。注意事项。 2）包囊的碘液染色检查：方法同上，以一滴碘液代替生理盐水。若同时需检查活滋养体，可在用生理盐水涂匀的粪滴附近滴一滴碘液，再盖上盖片。涂片染色的一半查包囊；末染色的一半查活滋养体。 3）隐孢子虫卵囊染色检查：目前较佳的方法为金胺酚改良抗酸染色法。对于新鲜粪便或经10％福尔马林固定保存的含卵囊粪便都可用此法染色。染色过程是先用金胺－酚染色，再用改良抗酸染色法复染。 厚涂片透明法（改良加藤法）取约5mg粪便，置于载玻片上，覆以浸透甘油－孔雀绿溶液的玻璃纸片，轻压，使粪便铺开（20×25mm）。待粪膜稍干，即可镜检。玻璃纸准备：将玻璃纸浸于甘油－孔雀绿溶液中，至少浸泡24小时，至玻璃纸呈现绿色。使用此法需掌握粪膜的合适厚度和透明的时间。如粪膜厚，透明时间短，虫卵难以发现；如透明时间过长，则虫卵变形，也不易辨认。 沉淀法：原虫包囊和蠕虫卵的比重大可沉集于水底，有助于提高检出率。但比重较小的钩虫卵和某些原虫包囊则效果较差。 方法：自然沉淀法；离心沉淀法；醛醚沉淀法； 自然沉淀法：取粪便20～30g、加水成混悬液，经金属筛过滤，再加清水冲洗残渣；过滤粪液在容器中静置25分钟，倒去上液，重新加满清水，以后每隔15～20分钟换水一次（3～4次），直至上液清晰为止。最后倒去上液，取沉渣作涂片镜检。 离心沉淀法：将上述滤去粗渣的粪液离心（1500～2000rpm/min）1～2分钟，倒去上液，注入清水，再离心沉淀，如此反复沉淀3～4次，直至上液澄清为止，最后倒去上液，取沉渣镜检。 醛醚沉淀法：置粪便1～2g加水10～20ml调匀，将粪便混悬液过滤，离心（2000rpm）2分钟；倒去上层粪液，加水10ml混匀，离心2分钟；倒去上液，加10％甲醛7ml。5分钟后加乙醚3ml，塞紧管口并充分摇匀，取下管口塞，离心2分钟，即可见管内自下而上分为4层。取管底沉渣涂片镜检。如检查原虫包囊，可加卢戈氏液染色，加盖片镜检。 浮聚法：利用比重较大的液体，使原虫包囊或蠕虫卵上浮，集中于液体表面。常用的方法有三种： 1.饱和盐水浮聚法； 2.硫酸锌离心浮聚法； 3.蔗糖离心浮聚法 饱和盐水浮聚法：此法用以检查钩虫卵效果最好。方法、优缺点、适用范围。饱和盐水配制：将食盐徐徐加入盛有沸水的容器内，不断搅动，直至食盐不再溶解为止 硫酸锌离心浮聚法：此法可用于检查原虫包囊，球虫卵囊和蠕虫卵。取粪便约1g，加水充分搅碎，按离心沉淀法过滤，反复离心3～4次，至水清为止，最后倒去上液，在沉渣中加入比重1.18的硫酸锌液（33％的溶液），调匀后再加硫酸锌溶液至距管口约1cm处，离心1分钟。用金属环取表面的粪液置于载玻片上，加碘液一滴，镜检。 蔗糖离心浮聚法：此法适用于检查粪便中隐孢子虫的卵囊。取粪便约加水并过滤。取滤液离心5～10分钟，吸弃上清液，加蔗糖溶液再离心，然后如同饱和盐水浮聚法，取其表液膜镜检（高倍或油镜）。卵囊透明无色，隐孢子虫的卵囊在漂浮液中浮力较大，常紧贴于盖片之下，但1小时后卵囊脱水变形不易辨认，故应立即镜检。也可用饱和硫酸锌溶液或饱和盐水替代蔗糖溶液。 毛蚴孵化法　取粪便约30g，先经重力沉淀法浓集处理,将粪便沉渣倒入三角烧瓶内，加清水（去氯水）至瓶口,在20～30℃的条件下经4～6小时后肉眼或放大镜观察结果。,如见水面下有白色点状物作直线来往游动，即是毛蚴。 肛门拭子检查法　适用于在肛周产卵（蛲虫），或常在肛门附近发现虫卵（牛带绦虫）的虫卵检查法。 棉签拭子法：用浸泡生理盐水的棉签，在肛门周围擦拭，随后将棉签放入盛有饱和盐水的试管中，用力搅动，迅速提起棉签并弃去，