色谱定性定量详解.ppt

三、色谱定性与定量方法 面积归一：Rg1=1.0%, Rb1=3.5% 外标法：Rg1=0.2%, Rb1=0.5% （1） 色谱定性分析 利用保留值及其规律定性 各物质在一定的色谱条件下均有确定不变的保留值，因此保留值可作为定性指标。 利用纯物对照定性 利用文献值对照定性（很少用） 纯物质对照定性 实现方法 利用保留时间和保留体积定性 用相对保留值定性 用已知物增加峰高法定性 应用范围：适用于简单混合物，对该样品已有了解并具有纯物质的情况。 优点：应用简便，不需要其他仪器。 缺点：定性结果的可信度不高。 提高可信度的方法：双柱、双体系定性 文献值对照定性分析 （GC） 实现方法 测定相对保留值ri,s 测定保留指数I 优点：无需纯物质；保留指数具有较好的重现性和精密度；只与固定相和柱温有关。 缺点：对结构复杂的物质，缺乏数据。 适用范围：适用于简单混合物，无需纯物质。 与其它仪器或化学方法联合定性 离线联用方式 在线联用方式 离线联用方式 收集方法：GC中一般采用液氮冷阱冷却后收集 应用范围：无标准物时，可对较为复杂的混合物进行定性分析 缺点：麻烦 在线联用方式 混合物经色谱分离后，将各组分直接由接口导入其它仪器中进行定性。常用的联用方法有：GC-MS、GC-FTIR、LC-MS……,其它仪器相当于色谱仪的检测器。 使用范围：复杂样品的定性。 优点：不需要标准物，定性结果可信度高，操作方便。 缺点：需要特殊仪器或设备。 （2）色谱定量分析 定量基础 色谱定量分析是基于被测物质的量与峰面积成正比。在一定色谱条件下有： 定量要解决的问题 峰面积的测量和计算 校正因子的测量与计算 色谱定量方法及其应用 峰面积的测量与计算 积分仪 色谱工作站 简便、速度快，精度高，可达0.2-2%，对小峰及不对称峰的结果准确，是色谱发展趋势。 重叠峰的测量 切线分峰 垂线分峰 连线分峰 计算机拟合分峰 校正因子的测量与计算 相对校正因子 由于绝对校正因子与仪器的灵敏度有关，又由于灵敏度与实验条件相关，且每一检测器的灵敏度都是不同的，它不容易测量准确，亦无通用性，所以实际工作中使用相对校正因子。 相对校正因子的表达式 质量校正因子 摩尔校正因子 相对响应值 相对校正因子的测量 理论上相对校正因子与试样、标准物质、检测器类型、载气类型有关，与其它色谱条件无关。 无纯物质时或对结果准确度要求不高时，相对校正因子可通过查表得。 即无纯物，手册上又无数据时，可用一些计算方法估算这些物质的相对校正因子。 定量方法 校正归一化法 —— 含归一化 内标法 —— 含内标标准曲线法 外标法 —— 含单点校正 校正归一化法 应用范围：当试样中各组分都能流出色谱柱，且在检测器上均有响应，各组分峰没有重叠时，可用此法。 优点：简便、准确，当操作条件如进样量等变化时，对定量结果影响很小，该法适合于常量物质的定量。 缺点：对该法的苛刻要求限制了它的使用。 归一化法 若各组分的定量校正因子相近或相同，则上式可简化为： 内标法 推导 将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称量的试样中。 适用范围：当只需测定试样中某几个组分，且试样中所有组分不能全部出峰时可用。 优点：受操作条件的影响较小，定量结果较准确，使用上不象归一化法那样受到限制，此法适合于微量物质的分析。 缺点：每次分析必须准确称量被测物和内标物，不适合于快速分析。 内标标准曲线法 fi,sms/m为常数K，此时Ci%=K·(Ai/As)，以Ci%对Ai/As作标准曲线。 优点：不必测校正因子，消除了某些操作条件的影响，方法简便，适合液体试样的常规分析。如白酒分析国标中采用此法。 外标法（标准曲线法） 用于常规分析 优点：操作简单，计算方便。 缺点：结果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。该法必须定量进样。 单点校正 当被测试样中各组分的浓度变化范围不大时而用单点校正法。 即配制一个与被测组分含量十分接近的标准溶液，定量进样，计算被测物的含量。 定量中的误差问题 样品的代表性（样品的前处理） 进样系统的影响 柱系统的影响 测量误差 定量结果的误差分析 * * 人参药材的HPLC图谱 5 1 1 8 7 5 4 2 3 6 人参皂苷标准品的HPLC色谱图 Rg1 Rb1 Re 丙二酰基人参皂苷Rb1 GC-MS 被测组分的质量 标准物质量 分子量 推导：