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艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术讲述
艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术
岳阳市疾控中心 白志永
艾滋病抗体检测及样品保存、运送
一、HIV抗体检测筛查方法
酶联免疫吸附试验(ELISA)
化学发光或免疫荧光试验
快速检测(RT)
(建议配备合格的快速检测试剂,灰区。)
二、 筛查程序
初筛和复检流程 (图1)
三、筛查试验结果的报告(建议用修改后报告单附表3)(例)
HIV抗体筛查试验用附表1、2进行报告,阴性反应报告为“HIV抗体阴性(-)”;阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。
四、 HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程
1、适用范围
HIV感染产妇所生婴幼儿;已满18个月的婴幼儿,其母亲HIV感染状态不详,儿童出现HIV相关临床表现,临床怀疑HIV感染的儿童。
2、 检测程序
五、样品的保存、运送
1、样品的保存
用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品,短期(1周)内进行检测的可存放于2~8℃, 一周以上应存放于-20℃以下。
2、样品的运送(例)
(1)应符合生物安全要求;
(2)应采用三层容器对样品进行包装。
第一层容器:直接装样品,应防渗漏。样品应置于带盖的试管内。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料,以免碰碎。
第二层容器:容纳并保护第一层容器,可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。
第三层容器:容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签、联系方式,还应易于消毒。
(3) 用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。
质量控制
一、 艾滋病抗体检测的统计学室内质量控制
1、试剂盒内部对照
即试剂盒提供的阳性和阴性对照血清。用于判断实验的有效性,不能作为室内质控品使用,内部对照结果无效,必须重新试验。
2、室内质控品
为非试剂盒组份的外部质控品,是为了监控检测的重复性而设置的,包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控,以该试剂盒临界值(Cut-off)的2~3倍为宜。作用:判断该批临床样品检测的有效性,每次实验必须包含室内质控品,其结果无效,必须重新试验。
二、 统计室内质控的主要表示方法—建立质控图
最常用的质控图是Levey-Jennings利维詹宁斯质控图,下面以ELISA方法检测HIV抗体为例,描述建立质控图步骤:
1、建立质控图参数
一般采用在不同批次检测取得至少20个数据,以建立一个临时性的均值和标准差
a、算术平均值():
Σx
= ──
n
b、标准差(s):是描述样品与均数之间离散程度的一个指标
s 计算公式为: ───────
∑( xn - )2
s = ───────
n-1
c、变异系数(cv):
s
cv = ──- × 100 %
2、绘制质控图
(a)在常规条件下,对同一批血清连续测定20次(天)或以上,获得一组S/CO值,求均数()和标准差(s), 超出2s或3s的数据不应删除。
(b)将均值()和标准差(s)分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵座标(Y轴),每一批次试验作横座标(x轴),绘制质控图。
(c)从第21次起,将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中,检验进入质控状态。
3、质控规则及其使用
质控规则的使用应检出随机误差和系统误差,目前有许多质控规则,常用的是12S和13S规则。
(a)告警(12S):当外部质控品的S/CO值超出+2s范围时,系统处于告警状态,应予注意,是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S做失控标准,有较高的假失控概率,所以一般不采用。
(b)失控(13S):当外部质控品的S/CO值超出+3s范围时,系统处于失控状态,本次实验结果不能被接受,可能是系统误差、随机误差或外部质控品 稳定性下降所致。
(c)漂移:连续几次(3~5次)外部质控品的S/CO值都落在均值的一侧则称为漂移,提示实验条件发生了较大的变化。
(d)趋势:连续几次(5~7次)外部质控品的S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势,通常由参数的缓慢改变引起。
艾滋病实验室生物安全
一、HIV的生物危害
第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。人类免疫缺陷病毒(HIV)属第二类病原微生物,是高
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