实验一微生物学实验室常用仪器和设备.docVIP

实验一 微生物学实验室常用仪器和设备 实验目的 主要了解微生物学实验室常用的仪器和设备。 一、火焰灯 火焰灯是接种工具灭菌及试管等物品无菌化处理的必备器材。 酒精灯、煤气灯是较理想的接种环灭菌器材，火焰的大小可根据需要自行调节。火焰柱可分为两层：外焰和内焰。外焰由于接触氧气丰富，热度很高，所以烧灼接种环或物品时应使用外焰。 近年来，市场上有电热接种环灭菌器，使用比较安全，特别适于结核杆菌实验操作。 二、接种工具 可以分为接种环和接种针两类。接种环用来挑取标本、菌液及划菌落涂平板等，直径一般为2～4mm，也可依需要自定。接种针则用来挑取单个菌落，穿刺高层琼脂等。为了适应不同的需要，接种器可以做成各种形式（见图1-1） 图1－1细菌接种工具 （有环者为接种环或称白金耳，无环者为接种针或称白金针） 三、显微镜 显微镜用于观察某些病原微生物和人体寄生虫的形态(包括病毒包涵体形态)。 一般的光学显微镜就可满足常规要求，其目镜常用5×、8×、10×，物镜常有10×、40×和100×（油镜），细菌和某些寄生虫虫卵等检验常用油镜，应注意保护油镜头。有条件的实验室还可装备暗视野显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、甚至能观察病毒等形态的电子显微镜。 四、温箱 温箱是进行细菌培养的基本设备，可调控温度范围一般在20℃～60℃，其容积可根据实际要求进行选择，温箱有隔水式和非隔水式两种类型。 培养一般的细菌时，温箱的温度应定在37℃。温箱应由控温仪进行温度控制，以避免由于温箱偶然升温使细菌死亡，或发育受影响。另外，温箱也可依需要设定其它温度，如26℃、43℃等。 五、CO2培养设备 用于分离和培养需要CO2气体才能生长的病原微生物。 市售专用的CO2培养箱但对于常规实验室来说成本太高，一般用蜡烛罐亦可满足要求以真空干燥罐、标本缸、甚至厌氧培养罐作为蜡烛罐，将接种的平板和试管放在罐内，然后放入点燃的蜡烛，再将罐盖盖好并用凡士林密闭，待蜡烛耗尽罐内的氧气，自行熄灭，即达到了所需的5～10％的CO2浓度。将蜡烛罐放入普通温箱孵育便可。也可用化学试剂产气法，如每升体积需枸椽酸（CeksO7，）9.3g、Na2HCO30.37g，两试剂混合置一小烧杯中然后置于罐内。向烧杯中加入10mL蒸馏水，立即将罐封闭，如此产生的CO2环境也比较理想。 六、高压灭菌设备 高压灭菌器是微生物学实验室必备的设备，用于培养基及其它物品的灭菌。 高压灭菌器有立式、卧式之分。也有比较小型的手提式高压灭菌器，适用于小型实验室，由于热源不同，又可分为蒸汽式和电热式，不同的实验室可根据具体情况选用。 七、冰箱 冰箱是微生物学实验室用于储存制备好的培养基、菌种、试剂等的必需设备。 冰箱的种类很多，家用和医用的均可。用于储存培养基，可选用O℃～4℃范围的冰箱；放置抗原、抗体等试剂最好选用-20℃，菌种保存放于-70℃冰箱最好。 实验二 消毒与灭菌 实验目的 熟悉和掌握对各种消毒灭菌法的原理及应用。 一、常用的热灭菌器 （一）干热灭菌器（烤箱） 干烤箱是两层金属板制成的方形或长方形密闭箱，外壁内层装有隔热的石棉板，箱底置有电炉，并附有温度计和自动温度调节器。主要用于平皿、吸管、试管等玻璃瓷、金属等器材的灭菌。灭菌时，打开通气口，加热到80℃或100℃，再关闭通气口，待温度达到160～170℃，维持2h。最高温度不得超过180℃，超过180℃时棉塞和包装纸会被烤焦。灭菌后，待温度下降到80℃以下时，再开箱取物，否则，冷空气突然进入，会使玻璃器材炸裂。 （二）高压蒸汽灭菌器 高压蒸汽灭菌器是一个双层的耐高压的金属圆筒，附有贮水、排水、加热、排气 阀门、安全阀门和压力计等装置。因其结构简单、移动方便，由于一般实验室常用小型的手提式高压蒸汽灭菌器。使用时密闭，所产生的蒸汽不能外溢而压力增加，则容器内温度亦相应增高。通常用15磅／寸2（1.05kg/cm2），温度即可达121℃，维持15～30min，就可杀死一切微生物（包括细菌芽胞）。 凡是耐高温、不怕潮湿的物品，如手术器械、敷料、手术衣、橡皮手套、生理盐水、基础培养基和废弃培养物等均可用此法灭菌。 二、紫外线灭菌作用 波长200～300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以265～266nm为最强，因其与DNA吸收光谱相一致。其杀菌机制是使病原微生物DNA相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而破坏DNA构型，干扰其正常复制，导致其死亡或变异。紫外线杀菌力虽强，但穿透力弱，所以仅用于实验室、病房、手术室的空气或物体表面的消毒灭菌。 ［材料］ 1.大肠杆菌及葡萄球菌的12h培养物 2.普通琼脂平板 3.紫外线消毒箱、接种环等 ［方法］ 1.接种环火焰灭菌，分别取大肠杆菌、葡萄球菌培养物均匀地接种