8个检测方法汇总.docVIP

一、酶联免疫法定量检测黄曲霉毒素M1（要购置包被抗体的酶标板） 试剂和仪器? 每一个盒中的试剂足够进行96个试验（包括标准测定孔），盒中的材料如下 1×96孔板（12条×8孔，可以拆分为单孔）包被有黄曲霉毒素M1单克隆抗体。 6×黄曲霉毒素M1标准溶液，3.0ml/瓶……………………………………………………白色盖 0 ppb （0标准）, ppt, 10 ppt, 25 ppt, 50 ppt, 100 ppt 黄曲霉毒素M1脱脂奶溶液，直接应用 1×酶标记物（15ml）………………………………………………………………….……绿色盖 过氧化物标记的黄曲霉毒素M1，直接应用 1×底物/发色剂（15ml）………………….………………………………………….….…..蓝色盖 红色溶液 1×反应终止液（15ml）……...……………….………………………………………….….红色盖 包含有1N硫酸 1×洗涤缓冲液（盐） 10mM的磷酸盐缓冲液（pH 7.4），含有0.05 % 的Tween 20 1×空白脱脂奶（15ml）……...……………….………………………………………….….白色盖 用于奶酪和加工食品样品提取 微孔板酶标仪（450nm） 100ml量筒（塑料或是玻璃） 样品提取用玻璃容器：过滤漏斗和烧瓶 离心机 振荡器 — 滤纸：Whatman No.1或是相当的滤纸 刻度移液管 — 100μl，200μl，1000μl微量加样器 试剂 — 甲醇 — 70%的甲醇溶液：制备70%的甲醇溶液用70ml甲醇与30ml蒸馏水或去离子水混合 — 蒸馏水或去离子水 步骤 10.1奶粉：按产品说明要求还原成液态奶，或1：10稀释 注：如需要提高实验精确度，可将鲜奶和奶粉复原液用冷冻离心机（3500g 2-8℃）离心10分钟去除脂肪；如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到2-8℃，再离心。 试验前准备 1. 使用之前将所有试剂回升至室温(20 - 25°C, 68 - 77°F)。 2. 使用之后立即将所有试剂放回2 - 8°C (35 – 46°F)。 3. 在使用中不要让微孔干燥，尽量避免间隔时间过长。 4. 在EIA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。 5. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，建议用盖子盖住微孔。 10.2被有抗体的微孔板条 将锡箔袋回至室温后，沿横向边压封线外侧剪开，取出需用数量的微孔板及框架， 将不用的微孔板立即放回原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2 - 8°C (35 – 46°F)。 注意：洗板推荐使用多道移液器，以保证每孔孵育时间相同。如果用单道移液器，推荐每次最多不要超过16个样品和标准品（2条）。 10.3 洗涤缓冲液 试剂盒中含有一包缓冲盐（4.），用1L蒸馏水完全溶解。配制好的洗涤缓冲液在2 - 8°C (35 – 46°F)下可保存4-6周。 另外： 用100ml的蒸馏水溶解1包洗涤缓冲液干粉，可以得到10倍洗涤缓冲液，在室温（20 - 25°C, 68 - 77°F）下10倍的洗涤缓冲液可以保存8-12周。 取1份10倍的洗涤缓冲液，取9份的蒸馏水混合，可配制直接使用的洗涤缓冲液。 10.4测定程序 1. 将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，标准及样品做平行，并记录标准及样品的位置。 2. 加入200μl的标准品（白色盖）或处理好的样品到各自的微孔中，每个标准和样品必须使用新的吸头，盖住微孔板在室温下（20 - 25°C, 68 - 77°F）孵育2小时。 3. 倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体。用洗瓶或多通道移液器将250μl洗涤缓冲液加入孔中，小心地使酶标板在平面上做圆周运动。再次倒出孔中的液体，完全除去孔中的液体，再重复操作洗涤步骤三次 4. 加入100μl酶标记物（绿色盖）到微孔，小心地使酶标板在平面上做圆周运动以充分混合。在室温下（20 - 25°C, 68 - 77°F）孵育15分钟。 5. 倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体。用洗瓶或多通道移液器将250μl洗涤缓冲液加入孔中，小心地使酶标板在平面上做圆周运动。再次倒出孔中的液体，完全除去孔中的液体，再重复操作洗涤步骤三次。 6. 加入 100μl底物/发色剂（蓝色盖）到微孔中，充分混合并在室温（20 - 25°C, 68 - 77°F）暗处孵育15分钟。 7. 加入100μl反应停止液（红色盖）到微孔中充分混合。混合好在450nm处测量吸光度值，以空气为空白，必须在加入停止液后5分钟内读取光度值。 二、奶粉中亚硝酸盐的测定 一、实验目的 1.掌握样品制备、提取的基