紫外分光光度计测蛋白、核酸及使用方法解决方案.pptVIP

紫外分光光度法测定蛋白质含量;2、实验原理 蛋白质组成中常含有酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸，在紫外光280nm波长处有最大吸收峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度呈正比，故可用紫外分光光度计通过比色来测定蛋白质的含量。由于核酸在280nm波长也有光吸收，对蛋白质测量有一定的干扰作用，但核酸的最大吸收峰在260nm。如同时测定260nm的光吸收，通过计算可以消除其对蛋白质测定的影响。因此如溶液中存在核酸时必须同时测定280nm及260nm的吸光度，才能通过计算测定溶液中的蛋白质浓度。;;4、实验步骤 在紫外分光光度计上，将未知的蛋白质溶液小心盛于石英比色皿中，以生理盐水为对照，测得280nm和260nm两种波长的吸光度（A280和A260）。将A280及A260波长处测得的吸光度按下列公式计算蛋白质弄高度 C=1.45A280-0.74A260 式中，C为蛋白质质量浓度（mg/ml）； 本法对微量蛋白质的测定既快又方便，它还适用于硫酸铵或其他盐类混杂的情况，这时用其他方法测定往往较困难。;;;;紫外分光光度计测定核酸含量;实验原理 DNA和RNA都有吸收紫外线的性质，最大吸收峰在260nm波长处。紫外吸收是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的性质，所有嘌呤和嘧啶的物质，都具有吸收紫外线的性质。 用1cm光径的比色杯测定核酸的A260nm时，1ug/ml的DNA溶液吸光度为0.020，同样浓度的RNA吸光度为0.024.因此，可以用下列公式计算样品的核酸含量 DNA浓度（ug/ml)=A 260/0.02 RNA浓度（ug/ml)=A 260/0.024;;实验步骤 将样品配置成每毫升含5~50μg的核酸溶液，于紫外分光光度计上测定260nm处的吸光度，按下式计算核酸浓度和两者的吸收比值： DNA浓度（ug/ml)=A 260/0.02 RNA浓度（ug/ml)=A 260/0.024;;;紫外分光光度计使用方法;认识 紫外分光光度计;认识 紫外分光光度计;认识 紫外分光光度计;紫外分光光度计使用方法;紫外分光光度计使用方法;紫外分光光度计使用方法;紫外分光光度计使用方法;紫外分光光度计使用方法;紫外分光光度计使用方法;