中枢神经系统血管母细胞瘤细胞与人脑神经元细胞差异蛋白质分析.pdfVIP

第 37 卷 2哪年 10 月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 Chinese Journal of Analytical Chemistry 中枢神经系统血管母组艘瘤细胞与 人脑神经无细胞差异蛋白质分析 刘杭1 ，2 谢蝶3 姚缝2 樊惠芝1 朱剑虹3 杨荒原叶，2 I (复旦大学化学系，上海 2仪)433) 2 (复旦大学生物医学研究院，上海 2侃1032) 气复旦大学附属华山磁院神经外科，上海2(阴40) 第 10 期 1439 -1444 摘要 以人工培养的中枢神经系统血管母绍跑瘤(Cen加1 ne罚。辙 system hemangíoblastoma , HB )绍施为研究 对象，发展了蛋白质级学分析方法，接定了 HB 细胞与人脑神经先细胞的差异蛋白质。采用在线 HPLC 串联 LTQ-臼hitrap 质谱鉴定样品的可洛维蛋白质，得到了 HB 细胞的蛋布震级表达谱。 HB 级路鉴走得到 674 个蛋 白质，神经元细胞鉴定获得 531 个蛋白质。根据基于肤段鉴定的蛋白质级半定黛分析方法对质谱数据进行蛋 白质的爱异比较分析，发现了波形蛋白{￥imenti剖， 14-3-3 e严ilon 蛋自牵挂碳酸哥哥每 ?(C细如onic 踊hy命精e ? , CA n)等在 HB 细胞中表达最发生明显变化的蛋白质，并对其进行了免疫组织化学染色分析α 结果报示，波 形蛋白 (Vimentin) 、 14鞠3-3 ef姐ìlon 蛋启以及碳酸富于酶童 (CA n) 等蛋在质表达戴的改变与骂骂的发病密切相 关，对探索 HB 的起源有重要藤义。 关键词 中枢神经系统血管母细胞瘤，蛋白质组学，高效液相色谱-质谱，半定最分析 1 引富 蛋白费表达蠢变化箭患是蛋白费组研究的重要内容之一。与稳定岗位素标记定璧法[J] 裙比，无标 记的蛋白质半定捷方法是一种为了弥补单纯依靠盾谱倍号强度定量的不足而提出的您最方法。本方法 结合了传统色谱法的以色谱睹面积为基础的定最方法，以肤段鉴定为基础进行色谱略的选取。其优点 在于:具有较好的重理性如线性起照;无需攘外操作(如爵位素标记) ，定最步骤全部也计算机完成;可 以灵活选择加入日知量的已知蛋白质或以样品本身含有的蛋白质为内标[2-6] 。 中拯神经系统血管母缰黯瘤(Ce恐怕1 nervous system hemangiohl础知邸，HB)菇啻兔子小路能良性静 瘤，其发病机理窒今尚未阐明。世界卫生组织在( http://www . who. ínt/ classífications/ icd/ )中将其归为 来据来定肿瘤。以往对日B 的研究多集中在 VHL 基菌上( Von Hippel-Lindau 民病，简称 VHL 病(7] ) ，并 未从蛋白质组角度对其进行过研究。因此，采用蛋白质组学分析技术研究 HB，对探讨其致病机理有着 重要意义。 本研究采用在生物样本实验中广泛采用的 HB 肿瘤细瘤，以工维攘栩色谱串联口0-伽hitrap 腰谱 技术鉴定 HB 细胞(简称 HB 组)和人脑神经元细胞(简称对照组)的可榕性蛋白质组，并利用半定最方 法寻找 HB 组与对照组的差异蛋白费。建立了狂怒组的高藏锺精度蛋白殷组表达谱，商时将高殷最精 度质谱应用于寻找 HB 致病的相关强白质，探讨了 HB 的发病机理。 2 实验部分 2.1 仪器均试剂 JY92却超声援结胞粉碎机(宁波黯芝生物科技股份有限公司) ; UV mini 1240 型紫外·可见分先光度 计(日本岛津公司) ;C制约fuge 5417R 离心机(德国 Eppendorf 公司); LTQ-Orbitrap 质谱仪(美闰赛默飞世 尔科技有照公司) .用 2.0sr2 XCalihur 软件包中的 LT守 Tune 控制， XCalihur 软件包中的Qualhrowser 和 Bioworks 软件是本实验的数据处理软件。毛细管高效液相色谱系统(荷兰 LC Packings 公司) ，由 Famos 微量进样器、S白tchos 微升级攘相色谱泵作时tchos 泵)和 Ultimate 绵升级液梧色谱泵( Ultimate 泵)组成， zαJ9-02-02 收稿 ;2αJ9-05-27 接受 本文系离家臼然科学3基金{窍。.2073汉阳〉军曾向家重大寨础研究计划伊73 计划，No.2捕7CB914100)资助 * E咽剧1: pyy?咯@ fuWm. edu. cn 1440 分析化学 第 37 卷 由 Chameleon 软件控制。 分析过程中共使用 3 根色谱柱:第一维分析使用强阳离子交换 Bio-SCX 柱(柱 1 ，内径 1 mm，柱长 150 mm，荷兰 LC-Packing 公司) ;第二维反相分析前使用脱盐/肤段富集