miR-21慢病毒载体构建及对骨髓间充质干细胞凋亡的影响.doc

miR-21慢病毒载体构建及对骨髓间充质干细胞凋亡的影响 付霞霏，何援利，王雪峰，陈小莹(南方医科大学珠江医院妇产科，广东省广州市 510282) 引用本文：付霞霏，何援利，王雪峰，陈小莹. miR-21慢病毒载体构建及对骨髓间充质干细胞凋亡的影响[J].中国组织工程研究，2017，21():1-5. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.01.001 ORCID: 0000-0002-0344-7620(付霞霏) 文章快速阅读： 文题释义： 慢病毒载体：是指人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)来源的一种病毒载体，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。 MOI：即感染复数，一般认为MOI是一个比值，没有单位，用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。每种细胞对慢病毒的敏感性不一样，因此通常以不同浓度的病毒液感染靶细胞并观察转染效果，以确定细胞对该病毒载体的最适感染复数。 摘要 背景：骨髓间充质干细胞移植后凋亡成为治疗化疗性卵巢早衰效果欠佳的主要原因。miR-21参与细胞增殖与凋亡的调控，有重要的抗凋亡作用。 目的：构建miR-21慢病毒载体并感染骨髓间充质干细胞，观察其对化疗药物磷酰胺氮芥诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的影响。 方法：构建携带miR-21基因慢病毒表达载体LVX-shRNA2-rno-miR-21-5p，双酶切及基因测序鉴定证实载体构建成功。对载体进行包装、测定病毒滴度。将慢病毒颗粒以不同感染复数(20和40)感染骨髓间充质干细胞，检测感染效率，使用real-time PCR法检测骨髓间充质干细胞中miR-21的表达。流式细胞仪、Hoechst33342染色检测骨髓间充质干细胞在磷酰胺氮芥模拟的化疗微环境中的凋亡率。 结果与结论：①成功构建miR-21慢病毒载体，病毒滴度约为6×10CFU/L；②载体转染骨髓间充质干细胞效率达90%以上；③miR-21组1(感染复数为20)、miR-21组2(感染复数为40)miR-21表达量明显高于骨髓间充质干细胞组及空载组(P=0.000)；④转染组骨髓间充质干细胞的凋亡率、凋亡指数均低于空载组及骨髓间充质干细胞组(P=0.001)；⑤实验成功构建大鼠miR-21慢病毒载体系统，miR-21上调能抑制骨髓间充质干细胞凋亡，促进细胞增殖。 stablishment of a lentiviral vector carrying rat miR-21 gene and its effect on apoptosis of bone marrow mesenchymal stem cells Fu Xia-fei, He Yuan-li, Wang Xue-feng, Chen Xiao-ying (Department of Obstetrics Gynecology, Zhujiang Hospital of Southern Medical University, Guangzhou 510282, Guangdong Province, China) Abstract BACKGROUND: Apoptosis in bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) occurs after transplantation, which is mainly responsible for unsatisfactory therapeutic effects on premature ovarian failure induced by chemotherapy. miR-21 participates in the regulation of cell proliferation and apoptosis, and has important anti-apoptotic effect. OBJECTIVE: To construct a lentiviral vector for rat miR-21 and observe its effects on apoptosis of BMSCs induced by phosphoramide nitrogen mustard. METHODS: Rat miR-21 gene was synthesized, amplified, and connected with the lentiviral plasmid pLVX-s