生物技术制药试卷A-答案.docVIP

生物技术制药试卷A 一、名词解释：（本题共10小题，每小题5分，共计50分） 1、生物药物：是指利用各种生物材料，综合采用各种生物技术的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。 2、抗生素：由微生物产生，在低浓度下能杀灭和抑制病原体，但对宿主不会产生严重的副作用的物质，或使用化学方法半合成的衍生物和全合成的仿制品。广义的抗生素还包括一些抗肿瘤药、杀虫剂和除草剂。 3、补料分批发酵： 是指将种子接入发酵反应器进行培养，经过一段时间之后，间歇式地、或者连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的方法。 4、限制性内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。IL；G-CSF；EPO；GM-CSF；r-SK；r-SAK；GH；EGF；bFGF；rhTPO；t-PA；SRM 答：IFN （人α-干扰素）；TNF （肿瘤坏死因子）；IL （白细胞介素）；G-CSF （粒细胞集落刺激因子）；EPO （促红细胞生成素）；GM-CSF （粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子）；r-SK （重组链激酶）；r-SAK （重组葡激酶）；GH （生长激素）；EGF （表皮细胞生长因子碱性成纤维细胞生长因子菌种选育（自然界选种、诱变育种、基因工程、细胞工程） 培养基配制（根据培养基的配制原则制备，实践中需多次试验配方） 灭菌（杀灭杂菌（胞体、孢子及芽孢） 扩大培养和接种 发酵过程（检测进程，满足营养需要；严格控制温度、pH、溶氧、转速等） 分离纯化（菌体：过滤、沉淀；代谢产物：蒸馏、萃取、离子交换） 简述基因工程操作流程 答：基因工程的操作流程： （1）分：分离目的基因； （2）切：对目的基因和载体适当切割； （3）接：目的基因与载体连接； （4）转：重组DNA转入受体细胞； （5）筛：筛选出含有重组体的受体细胞； （6）表：目的基因在受体细胞中表达，受体细胞成长为基因改造生物。 三、设计题 （本题共1题，共计10分） 请设计一个基因工程药物的生产工艺流程（应包括工程菌构建、扩大培养方法、产物分离纯化、质量检测等环节）。 答：干扰素a-2b 的制备 干扰素（INF）是人体细胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等等作用,是人体防御系统的重要组成部分,干扰素（INF）最早被用于诱导人体产生白细胞。 基因工程菌的组建 诱生的白细胞或者成纤维细胞提取核酸 ↓ 通过寡dT-纤维素柱提取mRNA pBR322质粒 ↓ ↓ 5%-23%蔗糖密度梯度离心提取12S-mRNA PstI内切酶切割 ↓ ↓ 由mRNA转录成cDNA 切割段位于β内酰胺基酶基因内 ↓ 结果导致内酰胺基酶失活，不抗青霉素 双链cDNA用末端PstI酶切割 ↓ 再用DNA转移酶接上dT或者dG 在pBR322质粒DNA的切割段加上dA或者dC ++++++++++++++++ 退火获得杂交质粒 ↓ 转化大肠杆菌K-12扩增杂交质粒 ↓ 筛选能够抗四环素、但是对氨苄青霉素敏感的细菌克隆株 ↓ 采用杂交翻译法挑选含有干扰素cDNA的克隆 ↓ 将干扰素cDNA克隆进表达载体 ↓ 在大肠杆菌中进行高效表达 ↓ （进入下游工艺） 基因工程菌的发酵生产 人干扰素a-2b的基因工程菌为SW-IFNa-2b/E.coli—DH5a。质粒使用PL启动子，含有四环素抗性基