家兔尿量及尿中钠,氯离子含量的影响.doc

实验九 利尿药对麻醉家兔尿量及尿中钠、氯离子含量的影响 【目的和原理】 学习急性利尿的实验方法，观察呋塞米对麻醉兔的利尿作用；学习测定尿液中钠离子和氯离子的方法。 尿液中的钠离子与醋酸铀镁试剂作用,被沉淀为醋酸铀镁,然后以亚铁氰化钾和试剂中剩余的醋酸铀作用,使成形棕红色的亚铁氰化铀。尿液中钠的含量越多,剩余的醋酸铀越少,显色越淡。反之,钠的含量越少,剩余的醋酸铀越多, 则显色越深。故从剩余的醋酸铀量,可间接计算出钠的含量反应式如下： ＮaCl+3(UO2)(CH3COO)2+Mg(CHCOO)2+CHCOOH —→(UO2)3MgNa(CH3COO)9+HCl 2(UO2)(CH3COO)2+K4〔Fe(CN)6〕 —→(UO2)2〔Fe(CN)6〕+4CH3COOK 棕 红 色 用硝酸银试剂将尿液中的氯离子沉淀为氯化银。如硝酸银略有过量，便与铬酸银作用，成形桔红色的铬酸银。其反应式如下： NaCl + AgN03 → AgCl↓+NaN03 2AgN03+K2Cr04→ AgCrO4 ↓ +2KN03 【实验对象】家兔,1.5～2.5 kg 一．家兔尿量的测定 【实验药品】25% 乌拉坦、1% 呋塞米 【实验器材】兔手术台、量筒、注射器、手术器械 【实验方法】 1.水负荷：灌胃给与自来水40 ml/kg，避免灌至气管。 2.麻醉：耳缘缓慢i.v.25% 乌拉坦4 ml/kg，随时观察角膜反射，反射消失即停止注射。 3.手术：背位固定家兔，剪去下腹部被毛，于耻骨联合上方切开皮肤约4～5 cm，并沿腹白线剪开肌肉，暴露膀胱，在少血管区作荷包缝合后行膀胱插管，在插管前要将插管里充满生理盐水。 4.记录每2 min的正常尿量，连续记录10 min。 5.耳缘静脉注射1% 呋塞米4 mg/0.4 ml/kg，记录给药后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 min的尿量（每2 min的尿量） 【实验结果】结果汇总，计算不同时间尿量的均值，以尿量毫升数为纵坐标，给药后时间为横坐标作图。 二．尿液中钠离子和氯离子的含量测定 测定体液中的钠离子以火焰光度法为最简便可靠,在没有火焰光度计的场合,也可用醋酸铀镁比色法来进行。测定体液中的氮离子则多用银滴定法。 ( 一 ) 尿中钠离子的醋酸铀镁比色测定法 【实验试剂】 1.醋酸铀镁试剂：取醋酸铀（U2(CH3COO)2·2H2O）4 g、醋酸镁（Ｍg(CH3COO)2·4H2O）15 g、冰醋酸15ml、加蒸镏水75 ml，加热溶解，并煮沸2 分钟。放冷后加蒸镏水至100 ml, 再???无水乙醇至500ml，于冰箱中过夜。除去底层的微量沉淀，将上清液贮存于棕色试剂瓶中，置冰箱中备用。 2.1% 醋酸溶液（V/V）。 3.10% 亚铁氰化钾溶液。 4.钠标准溶液： ①当量钠溶液：取氮化钠（Ａ．Ｒ．）少许置于烧杯中,放置110～120 ℃烘箱内4小时,取出后置于干燥器内待冷，精密称取5.845 g置于100 ml容量瓶内，加蒸镏水至刻度。 ②150 mEq/L钠标准液: 准确吸取当量钠溶液15.0 ml, 置于100 ml 容量瓶内, 加蒸镏水至刻度。 ③250 mEq/L 钠标准液: 准确吸取当量钠溶液25.0 ml, 置于100 ml 容量瓶内, 加蒸镏水至刻度。 ④200 mEq/L 钠标准液: 准确吸取当量钠溶液20.0 ml, 置于 100m1 容量瓶中 ，加蒸镏水至刻度。 【实验器材】 光电比色计、冰箱、离心机、烧杯、试管、吸管。 【实验方法】 1. 收集各实验组相应时间内的尿液，分别合并混匀，测量总量。分 别吸取各组尿液5ml, 加入氢氧化钙 0.2g, 摇匀,放置15分钟, 过滤, 以除去磷酸盐类。 2. 滤过之尿液与等量 200 mEq/L 钠标准液混合吸取 0.1 ml, 按表 5.1 操作。 表1 尿钠测定快速比色法操作步骤 步　　　　　　　骤管别空白管（ml）标准管(ml)测定管(ml)与 200mEq/ 钠标准液混合的尿液 150mEq/L 标准液 250mEq/L 标准液 醋　酸　铀　镁 试　剂— — 0.15.0— 0.1 — 5.00.1 — — 5.0以玻棒充分搅拌，使生沉淀，试管加塞，置冰箱中10分钟，离心沉淀。 分别吸取上清液于另外三只试管中 1% 醋　酸　溶　液 10% 亚铁氰化钾溶液0.2 8.0 0.40.2 8.0 0.4 0.2 8.0 0.4 混匀后,10 min 内用520 nm 或绿色滤光片光电比色, 以 250 mEq/L 钠标准管作空白管，校正光密度到0点，读取标准管（150 mq/L 钠溶液）及测定管的读数。 计算 Na+ mEq/L × 2.3=