研究生基因工程考试题目.docVIP

什么是蛋白质组学？请叙述蛋白质组学的研究内容和研究方法。（10分） 蛋白质组（proteome）是澳大利亚学者Williams和Wilkins于1994年首先提出，源于蛋白质（protein）与基因组（genome）两个词的杂合, 即“一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质”。 蛋白质组学(proteomics) 指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴科学，其目的是从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律。 在蛋白质水平上定量、动态、整体地研究生物体，它旨在阐明生物体全部蛋白质的表达模式及功能模式。 1）组成（表达）蛋白质组学 蛋白质表达谱（组织、器官、细胞、亚细胞分布等） 2）比较蛋白质组学 比较不同蛋白质组的差异与相似性； 3）结构蛋白质组学 蛋白质三维结构的解析(X-ray/NMR/modelling)； 4）功能蛋白质组学 蛋白质的功能和相互作用； 5）蛋白质组学研究的技术平台与生物信息学 分离、鉴定技术，分析软件和数据库。 蛋白质分离技术 凝胶双向电泳、HPLC； 蛋白质鉴定技术 Edman 测序、质谱技术； 图像分析与生物信息 图像分析软件，数据库； 相互作用研究技术 酵母双杂交技术、免疫共沉淀、蛋白质芯片等。 植物中转基因的方法有哪些？简述根癌农杆菌介导转化方法的原理及转化子的验证方法。（10分） 原生质体介导法 基因枪法 根癌农杆菌介导法原理：　　农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞)，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。　　根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中,并且可以通过减速分裂稳定的遗传给后代，这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。　　人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。　　农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应，主要包括：①受伤的植物细胞为修复创伤部位，释放一些糖类、酚类等信号分子。②在信号分子的诱导下，农杆菌向受伤组织集中，并吸附在细胞表面。③转移DNA上的毒粒基因被激活并表达，同时形成转移DNA的中间体。④转移DNA进入植物细胞，并整合到植物细胞基因组中。 简述酵母双杂交技术的原理及筛选过程。（10分）酵母双杂交系统巧妙地利用了真核生物转录调控因子的组件式结构特征。因为这些转录因子蛋白质往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成，其中DNA结合结构域（ binding domain BD）和转录激活结构域（activation domain AD)。这两个结构域各具有功能，互不影响，但一个完整的、具有活性的转录因子必须同时含有这两个结构域，否则就无法完成其激活功能。 不同来源的激活因子的BD区和AD区结合后则能特异地激活BD结合基因的表达。据此，可将两个待测蛋白（X和Y）分别与这两个结构域建成融合蛋白（BD-X和AD-Y），并且共表达于同一个酵母细胞内，如果两个待测蛋白间能发生相互作用，就会通过待测蛋白（X和Y）的桥梁作用使AD和BD形成一个完整的转录因子，并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因的检测就可能很容易知道待测蛋白质分子间是否发生了相互作用。 理论上，任何能在酵母中表达的基因均可作为报告基因，较为常用的是LacZ，和一些营养缺陷标记，这种报告基因只允许阳性克隆生长，最常用的是HIS3和LEU2。近来为了更灵敏、特异地筛选阳性克隆,常同时使用两种或两种以上的报告基因(如ADE2和URA3)，一则它可以允许用比单纯颜色筛选更大的菌落密度铺板，从而获得较丰富的表达产物，二则双重筛选相互验证，可以排除一些假阳性结果；三则转化体制造了大量的融合蛋白以保证基因产物满足生长需要，结果LacZ转录提高，从而β-半乳糖苷酶的活性亦增强 定点诱变技术经历了几个阶段？目前最理想的定点诱变方法是什么？叙述其操作过程。（10分） 什么是荧光定量PCR技术？以TaqMan探针为例，叙述并图示荧光定量PCR技术的工作原理。（10分） 和大肠杆菌表达系统相比，酵母表达系统表达外源目的基因有哪些优势？请简要介绍巴斯德毕赤酵母表达系统。（15分