10-肿瘤分子生物标志物流式定量分析.pptVIP

肿瘤分子生物标志物的流式定量分析;近年来已经发现多种肿瘤生物分子标志物，已将标志物应用于肿瘤诊断、判定疗效、预测预后和转移等方面，且有较大的肿瘤临床和研究的实用价值，并在研究癌变的发生和发展机制中引起人们的极大关注，特别在癌前期病变肿瘤标志物研究中，成为肿瘤防治研究的热点之一，已经显示出在癌变研究中具有重要意义。 流式细胞应用于肿瘤分子生物标志的检测已有较多的文献报道，如DNA异倍体、激素受体、癌基因和抗癌基因蛋白产物等，发现这些标志物与恶性肿瘤的发生、发展和细胞的分化、分级、转移和预后有一定相关性，现分述如下： ;一、DNA异倍体 ;㈠癌前病变出现DNA异倍体及在癌变早期诊断的意义。 ;目前，从病理形态学方法对于可能癌变的病例作出一个确切的诊断标准还十分困难。 研究证明，DNA异倍体的出现可能是癌前病变发生癌变的一个重要标志物，已有作者对食管、宫颈、胃、鼻咽、口腔粘膜癌前病变进行了流式DNA倍体分析研究。 Tedori等应用 FCM 分析了20例胃粘膜萎缩性胃炎伴不典型增生细胞的DNA倍体，发现DNA异倍体9例，其中5 例在随诊半年后被病理学确诊为癌变，发现异倍体与癌前病变细胞不典型增生程度有关。;作者对208例石蜡包埋组织、和1000 多例食管脱落细胞的癌前病变细胞流式 DNA 倍体分析(见表15)，并指出如下诊断标准，供参考。 1.出现DNA异倍体峰位诊断阳性。 2.S期细胞大于15%，G2M期大于10%(突出的四倍体峰位)诊断为阳性。 3.S期细胞大于 10-15%， 并有突出四倍体峰位，诊断为可疑癌。 4.GO/1期细胞峰的CV值大于9%，作为参考指标。 ;;我们的研究结果(见表16)，表明DNA异倍体可能是重要的癌变标志物。 ;从癌前病变中发现早期癌变和潜在癌变病例，并对其作出一个早期预警性诊断，已成为人们十分关注的研究焦点，通过对癌前病变细胞DNA异倍体的FCM检测，可能有助于对癌前病变作出病理学诊断的超早期癌诊断。 研究发现癌前病变细胞DNA含量与病变不典型增生程度密切相关(见表17)。DNA指数随不典型增生增高逐渐渐升高，从DNA含量进一步说明癌变并非由正常细胞突发为癌细胞，而是经过一个量变到质变的过程，癌前病变即处于量变过程。 ;;;出现DNA异倍体细胞群则证明从量变到质变的过程，Tedori 等认为，当癌前病变出现 DNA异倍体时， 说明已发生癌变或已具有潜在癌变的可能性， 尽管还不具备病理形态学的癌变诊断标准， 大多数研究者还发现，癌前病变不典型增生程度越重，DNA非整倍体出现率越高，不典型增生程度越重，癌变的发生率越高。 由此可见，癌前病变出现DNA非整倍体对预测和诊断癌变是一个重要而有价值的标志物， 对于形态学上诊断为癌前病变的病例， 有必要进行 DNA 倍体的检测， 对出现DNA异倍体病人，应 进行密 切的随访， 及时发现早期癌 变征象，做到早诊断、早治疗。 ;二、抑癌基因P53蛋白 ;因此，对癌基因与抗癌基因与癌变的关系研究成为肿瘤研究的热点之一，已随着分子生物技术的迅速发展和单克隆抗体技术的应用，大量具有高度特异性识别肿瘤细胞内外抗原的单克降抗体出现，为肿瘤研究寻找到了很多新的标志物。 癌基因和抑癌基因在人体组织的调整作用，是通过其效应分子蛋白质产物。近年来，由于生产出多种高度特异的癌基因蛋白产物的单克隆抗体，为探索癌基因与肿瘤发生、发展以及与肿瘤的生物学特性关系的研究辟出了新径。 ;P53基因是近年来发现的具有重要作用的抑癌基因，定位于人的17号染色体(17、13、1)其早在1979年就发现了P53基因。 当时是在被恶性转化的细胞内发现，被认为是一个原癌基因(oncogene)，因此没有引起研究者的重视，直到1989年，一些科学家的研究有了新发现，认为P53基因存在两种类型：即野生型(wild type)和突变型(Mutant type)，这两种类型的P53基因在人体内具有两种不同的作用。;野生型P53可以阻止细胞发生恶性转化，并可阻止受损伤细胞 DNA无法修复的细胞DNA复制过程，引起细胞凋亡 (Apoptosis)或程序性细胞死亡(program cell death. pcd)。这一发现使人们认识到野生型P53的一个重要功能是作用细胞增殖周期的一个调控点(check-point)。 野生型 P53 基因的丢失和突变，使 P53基因正常功能丧失，而成为突变型P53基因，科学家研究认为， 突变型 P53 可导致细胞增殖功能的增强。突变后的P53不但失去了正常调控细胞增殖分化的功能，而且可变为一个直接的肿瘤基因， 对细胞恶性转化起促进作用。 ;近年来的研究发现，在人类大多数恶性肿瘤中均存在P53突变基因，而且不同的致癌物可引起不同的特异性突变谱。因此P53