实验5聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血红蛋白-20151102选编.pptVIP

实验八 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血红蛋白;一、目的要求;电泳：带电粒子在电场中向着与其本身电荷相反的电极移动的过程。 电泳条件：水溶液（缓冲液）、支持物（区带电泳）、电场（电泳仪、电泳槽） 电泳分类：移动界面电泳、区带电泳、稳态电泳等。 区带电泳是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液，然后加电场，分子在支持介质上或支持介质中迁移，分离成一个个独立的区带。支持介质的作用主要是为了防止机械干扰和由于温度变化以及大分子溶液的高密度而产生的对流。 区带电泳使用不同的支持介质，早期有滤纸、玻璃珠、淀粉粒、纤维素粉、海砂、海绵、聚氯乙烯树脂；以后有淀粉凝胶、琼脂凝胶、醋酸纤维素膜，现在则多用聚丙烯酰胺（PAGE）和琼脂糖凝胶。; 聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)在加速剂N，N，N?，N?—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。 ;聚丙烯酰胺凝胶特点： 在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好； 化学性能稳定， 对pH和温度变化较稳定； 无吸附和电渗作用， 样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g 凝