第五章植物细胞制药(三).ppt

20世纪90年代以来，对于植物细胞及其代谢产物的研究进入了新的发展时期，并出现了很多新技术和新方法，比如诱导子、前体饲养、两相培养法、质体转化、毛状根和冠瘿瘤组织培养等，显示了植物细胞培养工程制药的广阔发展前景。;一、诱导子在植物细胞工程研究中的应用 利用诱导子进行有目的的次生代谢产物调控及生物合成，成为大幅度提高培养物中代谢产物含量的重要方法之一。 诱导子（elicitor），是植物抗病生理过程中诱发植物产生植物抗毒素和引起植物过敏反应（hypersensitive reaction, HR, 亦称抗性反应或自身防御反应）的因子，包括侵染植物的微生物及植物细胞内的分子。;;在植物细胞培养中加入诱导子(激发子Elicitor) 可以提高次生代谢产物的产量，并可促进产物分泌到培养基中。 ;1.诱导子的分类;（2）内源性诱导子 内源性诱导子主要指来自植物细胞的分子，多为植物细胞壁在微生物作用下的降解产物（如复杂多糖、糖蛋白）及沉积在细胞壁上的木质素。 多糖类又分为纤维素、半纤维素及果胶类。;（3）外源性诱导子 外源性诱导子亦称真诱导子（genuine elicitor），是指病源微生物在入侵植物时自身被降解的产物及其代谢产物。目前应用最多的是真菌诱导子，根据其结构可分为4类。 多糖类　　脱乙酰几丁质是真菌细胞壁被几丁质酶酶解的产物，是广泛使用的多糖类诱导子，它可诱导植保素的产生。木质素类及蛋白酶抑制剂，如大雄疫霉（Phytophthora megasperma）是由大雄疫霉细胞壁分离得到的多糖类诱导子，也是最常用的诱导子之一。;② 糖蛋白类　　作为微生物细胞壁组成成分之一的糖蛋白类，可诱导引发防御反应。如在Lucene悬浮培养细胞中加入来源于植物病原性真菌的α和β-糖蛋白可产生具抗菌作用的次生代谢产物。 ③ 蛋白质类　　包括一些酶类及具蛋白性质的物质如绿色木霉中的纤维素酶作为诱导子在Grapnine（真诱导子）的悬浮培养中可引起HR反应，另一来源于隐地疫霉的具有蛋白质性质的诱导子亦能诱导HR反应并大量积累植保素cryptogeion。 ④ 不饱和脂肪酸类　　不饱和脂肪酸类作为一种诱导抗性反应的诱导子，对其研究不是很???分，但已发现多聚不饱和脂肪酸（花生四烯酸）及其部分酯类可诱导马铃薯植保素risnitin和lubimin的产生。;2.诱导子的作用机制;3.诱导子在组织和细胞培养及其次生代谢产物生合成研究中的应用;（3）多糖类诱导子： 用不同的诱导子，如镰刀霉菌丝体、乙烯、水杨酸、几丁质和脱乙酰几丁质及其低聚糖，分别作用于多种模型植物上，结果表明用植物病原体镰刀酶感染植株可诱导产生几丁质酶及其同工酶，并表达了强效抗病原体的细胞溶解活性，说明植物可识别病原体并可被诱导产生抗病原体的几丁质酶。天然多糖如几丁质、脱乙酰几丁质及其低聚糖也具有强效细胞溶解活性的几丁质酶及其同工酶的各种功能。另外，多糖类诱导子除诱导改善植物次生代谢产物的产量外，还可通过多糖的胶化性质改变植物细胞膜的通透性及流动性。;（4）微生物类诱导子：通常是真菌诱导子，方法是将其悬浮培养的菌球匀浆处理，再将浆液高压灭菌处理，弃去残渣，得提取物或无菌真菌菌丝体粗提物.在无菌条件下将匀化产物加入到来源于不同组织、器官的细胞悬浮培养物中，同时作出作用时间曲线。 在紫杉属植物细胞培养物中为提高紫杉醇、紫杉碱的产量而向培养基中添加的诱导子为灰黄霉素、灰葡萄孢、大丽轮枝孢和融黏带酶的混合培养滤液，还有人用葡萄孢属的无菌菌丝体匀化产物诱导处理罂粟细胞培养物来积累血根碱。 不同诱导子作用于不同植物可以产生多种多样的次生代谢产物，可见从植物抗病生理角度来看，这些次生代谢产物多为植保素(植物抗病物质)，而在人类生活中，这些代谢产物也多为有益于人类健康的活性成分.;另一方面，诱导子运用于植物组织培养中亦存在一些问题。如内源性诱导子及酵母提取物是无毒的，而来源于真菌的诱导子多有很强的毒性.随着植保素的诱导合成，植物病原性真菌也诱导了一个过敏反应，就是病毒与宿主细胞相互作用部位细胞的坏死，从而使细胞生长率下降，并可能影响次生代谢产物的产量。 降低诱导子浓度可以减少生长的停止状态，然而在诱导子作用下形成次生代谢产物的过程中，低浓度的诱导子只能引起部分诱导，所以诱导的剂量不同，引起的效应也不同。诱导子在不同的作用时间都将在一定程度上影响次生代谢产物的含量，如桔青霉诱导子对红豆杉培养细胞中紫杉醇生合成的影响实验显示，在红豆杉细胞中指数生长期末期时加入诱导子，对紫杉醇合成的促进作用最大。;对于影响植物细胞培养物的生物量的增长和次生代谢产物的积累因素的变化，可因某一因素的调整而影响其他因素，所以在培养过程中要不断的加以平衡和研究。 植物具有其本身的特殊性，因此对一种植物细胞或一