新型原子力显微镜.ppt

原子力显微镜;第一代：光学显微镜;第一代：光学显微镜;第一代：光学显微镜;第二代：电子显微镜;第二代：电子显微镜;第三代：扫描探针显微镜;STM基本原理;AFM基本原理;AFM基本原理;仪器构成; 压电装置在X，Y，Z三个方向上精确控制样品或探针位置。 目前构成扫描器的基质材料主要是钛锆酸铅制成的压电陶瓷材料．压电陶瓷有压电效应，即在加电压时有收缩特性，并且收缩的程度与所加电压成比例关系．压电陶瓷能将1mV~1000V的电压信号转换成十几分之一纳米到几微米的位移。 ;力检测部分 ; (1)极低的Z向弹性系数，其值为10-2~102N/m。这样的微悬臂将极其灵敏，能够检测出小于1nN 的微小力。 (2)足够高的固有频率（＞10kHz），使AFM扫描时可以跟随表面轮廓的起伏。 (3)足够小的微悬臂：其长度必须在微米尺度才能符合要求。用光束偏转来测量悬臂的偏转时，其灵敏度反比于悬臂的长度。 (4)足够高的侧向刚性、以便尽可能地克服由于水平方向摩擦力造成的信号干扰。 ; (1)理想针尖的顶端应该是单个原子，这样的针尖能够灵敏地感应出它与样品表面之间的相互作用力。 (2)较高的纵横比，尽可能小的曲率半径。 (3)高的机械柔软性，针尖扫描时，即使撞击到样品的表面也不会使针尖损坏。 (4)高的弹性形变，可有效地限制针尖在样品表面上的作用力，从而减小对样品的损害，对柔软的生物样品特别有利。 (5)稳定的结构。;; 电容测量法; 隧道电流检测法; 光学干涉测量法; 光学偏转测量法; 光学偏转测量法;反馈电子系统 ;AFM的三种工作模式;接触式工作模式;接触式工作模式的特点;非接触式工作模式;非接触式工作模式的特点;轻敲工作模式;轻敲工作模式的特点;AFM假象; 1.针尖成像：AFM中大多数假象源于针尖成像．针尖比样品尖锐时，样品特征就能很好地显现出来。相反，当样品比针尖更尖时，假象就会出现，这时成像主要为针尖特征．高表面率的针尖可以减少这种假象发生． ; 2.钝的或污染的针尖产生假象：当针尖污染或有磨损时，所获图像有时是针尖的磨损形状或污染物的形状．这种假象的特征是整幅图像都有同样的特征。; 3.双针尖或多针尖假象：这种假象是由于一个探针末端带有两个或多个尖点所致．当扫描样品时，多个针尖依次扫描样品而得到重复图像。 ; 4.样品上污物引起的假象：当样品上的污物与基底吸附不牢时，污物可能被正在扫描的针尖带走．并随针尖运动，致使大面积图像模糊不清。; 5.样品-针尖间的作用力太小：探针不能顺利地扫描样品而出现横向拉伸现象。此时可以通过调节振幅衰减量来调节作用力。;在核酸研究中的应用 ; （2） AFM不仅可以研究整个复合物分子立体结构和空间构象，同时还可以利用某些特殊抗体蛋白或RNA分子在缓冲体系中与DNA 相互作用过程中重要结构参数变化来探究DNA区域分子构型，这是DNA研究的一个热点。 （3） 利用AFM可以控制生物大分子，调整生命的遗传与死亡规律，也可以在纳米尺度内将染色体的单拷贝基因复制扩增，切割剔除异常的碱基对，引起病理变化的逆转。 ;在蛋白质研究中的应用; ⑷ 在蛋白质的功能特性方面的应用 例如，Daniel等应用AFM在纳米分辨率上显示了膜蛋白的时间依赖性构象变化及聚集运动，成为经典的研究方法。 ⑸ 对蛋白质单分子操纵 人们通过AFM操纵可以直接检测到该结构域的力学稳定性。AFM 成像与操纵的联合使其能够宏观地从单分子尺度上对生物系统进行精确和可控的修饰和研究。 ;活细胞与微生物结构动态研究中应用;AFM与其他技术联用;AFM的特点;3. AFM能提供生物分子和生物表面的分子／亚分子高分辨率的三维图像。 4. AFM 也能以纳米尺度的分辨率观察局部的电荷密度和物理特性，测量生物大分子间(如受体和配体)的相互作用力。 5. AFM能对单个生物分子进行操纵，如可搬动原子、切割染色体、在细胞膜上打空。 ;缺点： 成像范围太小，速度慢，受探针的影响太大。; Thank you~