miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移的实验研究.pdfVIP

中国癌症杂志 2014年第24卷第11期 《 》 CHINA ONCOLOGY 2014 Vol.24 No.11 801 - miR 335靶向Rho相关卷曲螺旋形成 - 蛋白激酶1抑制人骨肉瘤细胞MG 63 侵袭转移的实验研究 1 2 1 王勇 　王科峰 　赵伟 1. 沈阳医学院附属中心医院骨四科，辽宁 沈阳 110024 ； 2. 中国医科大学附属盛京医院泌尿外一科，辽宁 沈阳 110004 　　［摘要］　背景与目的：微小RNA(microRNA，miRNA)是一类小分子内源性RNA，主要在转录后水平调节靶 基因的表达。microRNA-335(miR-335)作为一种肿瘤抑制因子，参与了多种人类肿瘤的发生、发展过程。本 研究旨在探讨miR-335是否靶向抑制Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled-coil forming protein kinase，ROCK1)基因的表达，并以此调控人骨肉瘤细胞MG-63侵袭及转移。方法：理论预测并通过荧 光素酶基因报告验证miR-335与ROCK1基因的3-非翻译区(untranslated region，UTR)的特异性结合作用； real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别从基因和蛋白水平检测miR-335对ROCK1表达的负性调控作 用；Transwell小室法检测miR-335过表达及下调ROCK1表达后MG-63侵袭及转移能力的变化。结果：Targetscan 预测显示，miR-335与ROCK1 3-UTR存在结合位点。荧光素酶基因报告实验结果显示，miR-335 mimic和 ROCK1 3-UTR能够靶向结合；miR-335在MG-63细胞中低表达，ROCK1则呈高表达。Western blot检测结果显 示，转染miR-335 mimic或转染ROCK1 siRNA后ROCK1的蛋白表达减少。Transwell小室法检测结果显示，过表达 miR-335或下调ROCK1后穿过基膜的细胞数目明显下降。结论：miR-335能特异性结合于ROCK1基因的3-UTR并 下调ROCK1的表达，抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移。 　　［关键词］　微小RNA-335；Rho相关卷曲螺旋形成蛋白液酶1；人骨肉瘤细胞MG-63；侵袭及转移 　　DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2014.11.001 　　中图分类号：R738.1　　文献标志码：A　　文章编号：1007-3639(2014)11-0801-07 miR-335 inhibits migration and invasion of human osteosarcoma cell line MG-63 by targeting ROCK1 WANG Yong1 2 1 th , WANG Ke-feng , ZHAO Wei (1.The 4 Department of Orthopaedics, the Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College, Shenyang Liaoning 110024, China; 2. The 1st Department of Urinary Surgery, Shengjing