四价抗病虫除草剂RNAi植物表达载体构建与转化甘蔗研究.pdfVIP

基 因组学与应用 生物学 ，????年 ，第 ??卷 ，第 ?期 ，第 ???—???页? ????????????????????????????，????，???．??，??．?，???—???? 技术主题? ??????????????????? 四价抗病虫除草剂 ????植物表达载体构建与转化甘蔗研究? 张卓? 陈平华? 许莉萍? 陈忠伟 施桂姣 王恒波 邰连赛 项慰 高三基 刘迪 陈容 陈如凯? 福建农林大学农业部福 建甘蔗生物学与遗传 育种重 点实验室，农业部甘蔗及制 品质量监督检验测试 中心转基因检测 室，福州，??????? 通讯作者，???????????．???? 摘 要 甘蔗是重要的能源作物和糖料作物，面临病虫害 日益严重 问题 。由于甘蔗遗传背景非常复杂，且缺? 乏必要种质，难以通过杂交培育抗病虫、除草剂聚合品种。基因工程技术提供了新方法。本研究利用 ?????? 比对 获 得甘蔗 花 叶病 毒 ????—??基 因和黄 叶 病毒 ?????—??基 因的保 守序 列作 为干 扰序 列 ，通过 设计 内切? 酶位 点、生物 合成和 连接 ，获得全 长 ??????的两个 保 守序 列融合 片段 ??????。并将 其正 向和反 向插入 中间? 载 体 ?????????上 ，形 成双 价病 毒干扰 结构 。再通过 在 ?????????上添 加 ????内切酶 位 点 ，将双 价病? 毒干 扰 结构表 达框和 ??????基 因表达框 结 合 ；利 用 ?????酶切 ，回收双 价病 毒干 扰结构 和 ??????基 因表达? 框片段，连接到添加 ???基 因表达框的表达载体 ????????上，构建了抗病虫及除草剂四价植物表达载体? ???????一????—???????。采用基因枪法将构建好 的四价植物表达载体转入甘蔗品种 ????的胚性愈伤组? 织 中，通过 ????草丁膦?筛选获得了抗性再生甘蔗植株，经过 ???、定量 以及? 蛋 白试纸检测，获得同时整? 合 四种 目的基 因并表 达 的四价 转基 因甘蔗 植株 ，为培 育多抗 甘蔗新 品种 提供 了材料 。? 关键词 ????．??基因，?????—??基因，??????基因，???基因，转基因甘蔗? ??????????????????????????????????????????????????????????????，???????? ?????????? ?????????????????????????????????????????????????????? ????????? ?????????? ??????????? ????????????? ?????????? ?????????????? ???????????? ???????????? ???????????? ?????????? ?????????? ??????? ?????????? ???